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文檔簡介
1、本研究利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將從極度抗旱、耐鹽植物檉柳中克隆得到的TabZIP基因?qū)胄『跅罨ǚ壑仓昊蚪M中,然后對轉(zhuǎn)基因小黑楊和非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招『跅罱M培苗進(jìn)行鹽、重金屬、旱脅迫處理,比較它們抗性的強(qiáng)弱,篩選出抗性優(yōu)良的轉(zhuǎn)基因株系。
通過對小黑楊花粉植株的遺傳轉(zhuǎn)化,共獲得3株卡那霉素抗性芽,對其進(jìn)行PCR檢測,結(jié)果均為陽性;進(jìn)行實(shí)時熒光定量RT-PCR檢測,結(jié)果顯示目的基因在3個株系中均有表達(dá)量,說明外源基因在RNA水平上得到表達(dá);進(jìn)
2、一步對3個轉(zhuǎn)基因株系進(jìn)行Western雜交分析,結(jié)果顯示轉(zhuǎn)基因株系在16.5Ku處均出現(xiàn)抗TabZIP抗體特異性雜交譜帶,表明3個轉(zhuǎn)基因小黑楊組織細(xì)胞中均有TabZIP基因表達(dá)的蛋白產(chǎn)物。
分別對3個轉(zhuǎn)基因株系進(jìn)行了NaCl脅迫、重金屬和干旱脅迫處理,比較逆境脅迫條件下轉(zhuǎn)基因小黑楊與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招『跅顭o根組培苗高生長、葉片數(shù)、傷害指數(shù)、根生長等指標(biāo)及鹽脅迫后組培苗葉片分化的出芽率、葉片傷害指數(shù),結(jié)果表明,無根組培苗用0.8%N
3、aCl處理20d后,除了葉片數(shù)各株系間無顯著差異外,各轉(zhuǎn)基因株系無論是相對高生長還是生根指數(shù)均顯著大于非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩晗担瑐χ笖?shù)均顯著小于非轉(zhuǎn)基因株系,對照的相對生長量是11.6%,轉(zhuǎn)基因小黑楊的平均相對生長量為84.8%,轉(zhuǎn)基因小黑楊生根指數(shù)高于對照約1.64倍,傷害指數(shù)小于對照71.4%;轉(zhuǎn)基因株系組培苗葉片在0.6% NaCl處理后,出芽率高于對照株系21.3%,葉傷害指數(shù)低于對照60.2%。以上說明,鹽脅迫條件下轉(zhuǎn)基因小黑楊受害
4、程度明顯小于對照,抗鹽能力有所增強(qiáng)。
0.2mmol/LCu2+脅迫30d后,轉(zhuǎn)基因小黑楊平均高度高于對照31.1%,相對生長量和葉片數(shù)量與對照達(dá)到顯著性差異,分別大于對照6.1倍和32.7%,傷害指數(shù)與對照也達(dá)到顯著性差異,小于對照29.8%,生根指數(shù)除TB3與對照無顯著性差異外,其它2個株系皆顯著大于對照,平均生根指數(shù)大于對照1.93倍,分析說明TabZIP基因增強(qiáng)了小黑楊對重金屬脅迫的抵抗能力。
無根組培苗用5
5、%PEG6000處理30d后,轉(zhuǎn)基因小黑楊平均高度高于對照18.7%,相對生長量更是明顯大于對照,平均葉片數(shù)轉(zhuǎn)基因株系TB3最少,為6.77,對照次之,為7.33,TB1、TB2分別是8.33和8.50,傷害指數(shù)轉(zhuǎn)基因株系低于對照29.6%,且平均根長是對照的2.78倍,生根指數(shù)也均大于對照,所以TabZIP基因的導(dǎo)入也提高了小黑楊的抗旱能力。
綜合以上結(jié)果,TabZIP基因的表達(dá)能夠不同程度提高轉(zhuǎn)基因小黑楊的抗鹽、抗重金屬及
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