轉(zhuǎn)TaLEA小黑楊矮化突變株鑒定及側(cè)翼序列關(guān)鍵基因的表達(dá)分析.pdf

1、植物突變體是開展遺傳研究，確定基因功能的良好材料。因此，人們采用物理的化學(xué)的方法誘導(dǎo)植物突變，獲得突變體。但這些突變體的突變基因位點(diǎn)隨機(jī)性強(qiáng)，很難確定具體位置并克隆得到基因。隨著新技術(shù)的發(fā)展，對(duì)于全基因組已知的植物采用插入誘變而導(dǎo)致性狀變異，再進(jìn)行基因克隆，使過去很難完成的事情變得非常容易了。人們可通過TAIL-PCR技術(shù)擴(kuò)增其插入片段的側(cè)翼序列，找到相近的基因，并對(duì)基因的功能進(jìn)行分析，從而確定突變基因。
　　本研究就是針對(duì)這樣一

2、個(gè)矮化突變體進(jìn)行研究的。在前期的小黑楊轉(zhuǎn)TaLEA基因研究中，獲得了11個(gè)轉(zhuǎn)基因株系，其中1個(gè)株系表型為矮化突變，命名為XL11。以11個(gè)轉(zhuǎn)基因株系（包括矮化突變體）及野生型對(duì)照小黑楊為試材，開展生長(zhǎng)性狀、葉片解剖結(jié)構(gòu)比較研究。發(fā)現(xiàn)在葉面積、氣孔密度、葉片厚度等方面矮化突變株系XL11株系明顯低于其他參試株系;角質(zhì)層厚度、柵海比，氣孔大小等方面XL11株系顯著高于其他參試株系。進(jìn)而以XL11株系為材料，采用TAIL-PCR方法克隆插入位

3、點(diǎn)的旁側(cè)序列得到AP2/PthRAV(XM_002311402.1)。熒光定量分析發(fā)現(xiàn)AP2/PthRAV的相對(duì)表達(dá)量在XL11株系中顯著高于其它轉(zhuǎn)基因株系及野生型平均值的7.78倍，初步認(rèn)為該株系在生長(zhǎng)及葉片解剖結(jié)構(gòu)等性狀的改變，可能與AP2/PthRAV上調(diào)表達(dá)有關(guān)。進(jìn)而對(duì)矮化株與與野生型的AP2/EREBP轉(zhuǎn)錄因子超家族進(jìn)行表達(dá)譜分析，深入分析該家族基因的結(jié)構(gòu)與功能，發(fā)現(xiàn)其與植株的生長(zhǎng)發(fā)育緊密相關(guān)，影響根部的發(fā)育。隨后構(gòu)建了植物超