轉(zhuǎn)Xa23基因水稻的白葉枯病抗性及T-DNA側(cè)翼序列分析.pdf

1、水稻白葉枯病是水稻生產(chǎn)中最為嚴(yán)重的細(xì)菌性病害之一，它是一種維管束病害，選育和推廣抗病品種是防治該病最有效方法之一。目前已知抗白葉枯病的基因有31個(gè)之多，但在生產(chǎn)中應(yīng)用的很少，主要為秈稻品種中Xa4基因和粳稻品種中Xa3基因，這兩個(gè)抗病基因在我國(guó)部分稻區(qū)已喪失抗性。其中Xa21基因是在非洲長(zhǎng)花野生稻(Oryzae longist aminata)中發(fā)現(xiàn)的1個(gè)顯性抗病基因，但是在國(guó)內(nèi)外的許多稻區(qū)發(fā)現(xiàn)也喪失抗性。Xa23基因是從野生稻中發(fā)掘的

2、新基因，是目前已知抗譜最廣的抗白葉枯病基因，具有完全顯性和全生育期高抗的特點(diǎn)，該基因?qū)﹄s交稻的改良和生產(chǎn)具有廣闊的應(yīng)用前景。 本研究采用田間接種鑒定和分子檢測(cè)(PCR鑒定和Southern blot檢測(cè))對(duì)轉(zhuǎn)基因群體(從T0代至T2代)的穩(wěn)定性和遺傳模式進(jìn)行了系統(tǒng)的分析，并獲得純合和穩(wěn)定遺傳的轉(zhuǎn)Xa23基因種質(zhì)資源。并對(duì)部分T1代的單拷貝單株采用PCR-Walking的方法進(jìn)行側(cè)翼序列分析，確定其T-DNA插入水稻基因組中的位置

3、效應(yīng)。 主要研究結(jié)果如下： 1、通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)Xa23基因水稻的當(dāng)代群體接種鑒定，篩選出了抗病程度不同的轉(zhuǎn)基因材料。對(duì)轉(zhuǎn)基因材料后代群體接種鑒定結(jié)果表明，后代群體對(duì)白葉枯病的抗性是可以穩(wěn)定遺傳和表達(dá)。 2、通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)Xa23基因水稻當(dāng)代和后代群體PCR檢測(cè)，結(jié)果表明受體植株獲得抗病性并可以檢測(cè)到潮霉素抗性。Southern blot分析結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)基因當(dāng)代與后代植株其雜交條帶大小和帶型一致，從分子水平上證明了外源基因在水

4、稻基因組中可以穩(wěn)定表達(dá)和遺傳。 3、對(duì)T1代群體中選取的4個(gè)單拷貝單株采用PCR-Walking的方法進(jìn)行T-DNA側(cè)翼序列的擴(kuò)增，結(jié)果發(fā)現(xiàn)只有2006單株得到預(yù)期的條帶，其測(cè)序結(jié)果表明T-DNA．插入水稻基因組的第12染色體上，正向插入水稻基因組的具體位點(diǎn)是9311水稻基因組的11284676 bp處，該位點(diǎn)位于ORF框OS1290291600與OS1290291800之間的內(nèi)含子中，為非編碼序列。ORF框OS12902916