凋亡抑制基因Bcl-2表達(dá)與支氣管哮喘關(guān)系的研究.pdf

1、目的：支氣管哮喘的發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜，涉及到遺傳、環(huán)境、行為、心理、機(jī)體免疫等諸多方面，雖然世界各國對支氣管哮喘的發(fā)病及防治作了大量的研究，但其發(fā)病機(jī)制至今尚未完全闡明。目前認(rèn)為細(xì)胞凋亡與支氣管哮喘發(fā)病相關(guān)。Bcl-2基因是人們近年來廣泛重視并研究的一種原癌基因，這是一種凋亡抑制基因，可抑制多種細(xì)胞凋亡，不僅在細(xì)胞凋亡的分子調(diào)節(jié)中起著重要的作用，而且與多種疾病的發(fā)生發(fā)展存在密切的關(guān)系。目前國內(nèi)外對Bcl-2基因與腫瘤的關(guān)系研究較多，而與支

2、氣管哮喘的相關(guān)性研究報(bào)道不多。本研究測定支氣管哮喘患者外周血白細(xì)胞Bcl-2基因mRNA的表達(dá)量及其血清中蛋白的含量，從基因水平研究BCL-2在支氣管哮喘中的表達(dá)及其相互關(guān)系。初步探討B(tài)cl-2基因在支氣管哮喘的發(fā)生、發(fā)展中的生物學(xué)意義，從而為支氣管哮喘新的治療方法如基因治療提供一定的理論依據(jù)。 方法：選取20例2004～2005年在海南省人民醫(yī)院門診就診或住院的支氣管哮喘中重度發(fā)作患者為實(shí)驗(yàn)組，20例無支氣管哮喘、變態(tài)反應(yīng)性疾

3、病的健康人為對照組。采取抗凝靜脈血標(biāo)本5ml，立即用Dextron-PBS分離出血白細(xì)胞，采用TristarTM試劑按試劑盒說明提取總RNA，-80°超低溫冰箱保存，采用TaKaRa試劑盒檢測Bcl-2基因mRNA表達(dá)量。 兩步法：第一步：用ExScriptTM反轉(zhuǎn)錄酶，對BCL-2mRNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA；第二步：用PremixExTaqTM酶對反轉(zhuǎn)錄后的cDNA進(jìn)行擴(kuò)增，10倍梯度稀釋cDNA模板，分別為100、10-1、1

4、0-2、10-3、10-4倍梯度，BCL-2基因引物由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成上游引物：5’-GGTGCCACCTGTGGTCCACCT-3，下游引物：5’-CTTCACTTGTGGCCCAGATAGG-3’，用美國PE公司5700型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀進(jìn)行檢測，以GAPDH基因?yàn)閷φ栈?，用儀器附帶SDS軟件自動算出Bcl-2基因與對照基因比值，確定Bcl-2基因的相對含量。同時(shí)抽取抗凝靜脈血2ml，伊紅染色，光學(xué)顯微鏡下

5、外周血嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)。抽取不抗凝靜脈血2ml，分離血清，采用澳大利亞BenderMedsystems公司人Bcl-2蛋白檢測試劑盒，按試劑盒說明操作，通過酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測Bcl-2蛋白含量。應(yīng)用SAS6.12計(jì)算機(jī)軟件對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果：支氣管哮喘患者外周血嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)較正常對照組比較有非常顯著性增加(P＜0.01)，20例支氣管哮喘患者外周血細(xì)胞Bcl-2基因mRNA表達(dá)量高于正常對照組，兩

6、組有非常顯著性差異(P＜0.01)，外周血清Bcl-2蛋白含量與正常對照組差異無顯著性(P＞0.01)。 結(jié)論：支氣管哮喘是以外周血嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)增高，氣道嗜酸性粒細(xì)胞浸潤為特征的慢性炎癥。本研究證實(shí)支氣管哮喘患者外周血嗜酸性粒細(xì)胞顯著增多。支氣管哮喘患者外周血細(xì)胞Bcl-2基因mRNA表達(dá)顯著增多，揭示Bcl-2基因在支氣管哮喘發(fā)病中具有一定的作用和意義，Bcl-2基因與支氣管哮喘密切相關(guān)。而外周血清中Bcl-2蛋白含量與支