大鼠顱腦手術(shù)止血材料的應(yīng)用及其轉(zhuǎn)歸.pdf

1、目的:制作大鼠外傷后腦出血模型，在顱內(nèi)出血灶應(yīng)用止血材料（可吸收明膠海綿、Surgicel）進(jìn)行止血，觀察止血材料在光鏡下、電鏡下的變化，以及應(yīng)用止血材料后出血部位腦組織的病理改變，腦細(xì)胞的凋亡情況。
　　 方法:
　　 1、大鼠外傷性腦出血模型的制作
　　 Wistar大鼠72只，雌雄不限，體重300-350克，隨機(jī)分為:
　　 ①對(duì)照組24只，手術(shù)后不應(yīng)用止血材料僅應(yīng)用棉片壓迫止血；
　　 ②

2、止血材料組48只，術(shù)后應(yīng)用止血材料止血，根據(jù)手術(shù)后應(yīng)用可吸收明膠海綿或Surgicel分為兩個(gè)小組，每組24只。
　　 對(duì)照組、明膠海綿組、Surgicel組根據(jù)處死時(shí)間（5天、10天、15天、20天、25天、30天）各分為六個(gè)亞組。每個(gè)亞組4只。
　　 將大鼠用10％水合氯醛腹腔麻醉后，縱行切開顱項(xiàng)皮膚，在右側(cè)頂骨（距矢狀縫，冠狀縫各5mm）處用牙科磨鉆仔細(xì)打磨出一直徑5mm的骨窗，保持硬膜的完整不受損。應(yīng)用外科3-0

3、帶線縫合針劃開硬膜，不觸及皮層，暴露腦組織，硬膜出血采用沾水棉片壓迫止血。應(yīng)用顯微取瘤鑷夾取大腦皮層范圍:2mm×2mm×1mm，造成外傷出血模型，按照分組應(yīng)用棉片壓迫、可吸收明膠海綿、Surgicel進(jìn)行有效止血。完全止血后縫合傷口。術(shù)后大鼠正常進(jìn)食，不能進(jìn)食者給糖水灌胃。于5天，10天，15天，20天，25天，30天時(shí)分別處死各組4只大鼠。
　　 2、光鏡下觀察應(yīng)用吸收性明膠海綿、Surgicel及對(duì)照組的大鼠腦組織H-E染

4、色組織切片
　　 于5天，10天，15天，20天，25天，30天時(shí)分別處死各組2只大鼠，經(jīng)左心室-升主動(dòng)脈插管，快速灌注生理鹽水150ml、4％多聚甲醛300ml（4℃，0.1M的PBS配制，PH7.4）先快后慢灌注2h，待大鼠四肢僵直后斷頭取腦。用4％多聚甲醛固定24小時(shí)以上。切取應(yīng)用止血材料部位的腦組織，常規(guī)酒精梯度脫水、透明、石蠟包埋，連續(xù)切片5μm。做蘇木精-伊紅(H-E)染色。采集圖像。
　　 3、透射電鏡及掃

5、描電鏡下觀察應(yīng)用吸收性明膠海綿、Surgicel及對(duì)照組的大鼠顱腦損傷切片
　　 于5天，10天，15天，20天，25天，30天時(shí)分別處死各組2只大鼠，經(jīng)左心室-升主動(dòng)脈插管，快速灌注生理鹽水150ml、4％多聚甲醛300ml（4℃，0.1M的PBS配制，PH7.4）先快后慢灌注2h，斷頭取腦，切取應(yīng)用止血材料部位的大鼠腦組織，4％戊二醛固定24h，掃描電鏡標(biāo)本制備為:3mm×3mm×1mm，1％鋨酸固定1h，經(jīng)酒精梯度脫水，真

6、空干燥，噴金鍍膜后采集圖像。透射電鏡標(biāo)本制備為1mm×1mm×1mm，1％鋨酸固定1h，經(jīng)硬化標(biāo)本制備，超薄切片，溶液成膜，復(fù)型成膜后采集圖像。
　　 4、觀察應(yīng)用吸收性明膠海綿、Surgicel及空白組的腦組織細(xì)胞凋亡改變
　　 每組隨機(jī)選取蠟塊固定的一個(gè)標(biāo)本，經(jīng)過切片，脫水、水合，細(xì)胞通透，TUNEL反應(yīng)液作用，converter-POD作用，與底物DBA反應(yīng)顯色后在高倍鏡下隨機(jī)選取三個(gè)視野計(jì)數(shù)并拍照。
　　

7、 結(jié)果:
　　 1、光鏡下創(chuàng)傷腦組織的病理改變與止血材料的吸收與轉(zhuǎn)歸
　　 在5d、10d、15d的腦組織切片H-E染色切片顯示:三個(gè)實(shí)驗(yàn)組的出血灶炎癥反應(yīng)均明顯，周圍存在壞死破碎腦組織。單核細(xì)胞浸潤(rùn)，紅細(xì)胞彌漫性存在于破碎的腦組織、止血材料間隙中。隨著時(shí)間的遷移，炎癥反應(yīng)逐漸減輕，單核細(xì)胞與紅細(xì)胞的數(shù)量減少。對(duì)照組可見神經(jīng)細(xì)胞水腫，大量單核細(xì)胞浸潤(rùn)，局部可見紅細(xì)胞變形破碎。紅細(xì)胞破碎，釋放的血紅蛋白被氧化變成黃色。吸收

8、性明膠海綿與腦組織的貼附性較Surgicel差，炎癥反應(yīng)較重，并且占位空間也較大。實(shí)驗(yàn)證實(shí):Surgicel在與腦組織的組織相容性方面優(yōu)于可吸收明膠海綿。
　　 2、電鏡下創(chuàng)傷腦組織的病理改變與止血材料的吸收與轉(zhuǎn)歸
　　 2.1、掃描電鏡下創(chuàng)傷腦組織的病理改變與止血材料的吸收與轉(zhuǎn)歸
　　 出血部位腦組織可見明顯的腦水腫、軟化灶。水腫灶、軟化灶與正常部位腦組織界限較為明顯。空白組與Surgicel組在25天的標(biāo)本可

9、見水腫程度較之前的標(biāo)本減輕，而吸收性明膠海綿在25天的標(biāo)本仍存在明顯的水腫。對(duì)照組可見腦組織破碎，出血灶腦組織參差不齊，腦水腫。少數(shù)出血灶仍可見未變形的紅細(xì)胞。在同一時(shí)間點(diǎn)可吸收明膠海綿仍可見明顯的顱內(nèi)占位效應(yīng)。Surgicel與腦組織的貼附性優(yōu)于比吸收性明膠海綿。隨著時(shí)間的進(jìn)展腦水腫逐漸減輕。
　　 2.2、透射電鏡下創(chuàng)傷腦組織的病理改變與止血材料的吸收與轉(zhuǎn)歸
　　 術(shù)后5d腦組織的吞噬細(xì)胞吞噬大量變性壞死的神經(jīng)纖維。

10、術(shù)后15d與25d的神經(jīng)元在不同組別有所不同。對(duì)照組以神經(jīng)元細(xì)胞固縮、線粒體腫脹、高爾基體擴(kuò)張、神經(jīng)纖維水腫為主。吸收性明膠海綿組中神經(jīng)元細(xì)胞腫脹較輕，部分線粒體空泡化、線粒體腫脹、高爾基體擴(kuò)張。Surgicel組神經(jīng)元細(xì)胞胞漿水腫、神經(jīng)元突起水腫、線粒體腫脹、高爾基體擴(kuò)張。
　　 3、應(yīng)用吸收性明膠海綿、Surgicel以及對(duì)照組實(shí)驗(yàn)的腦組織凋亡改變陽性凋亡細(xì)胞在細(xì)胞膜上和胞質(zhì)中均出現(xiàn)棕黃色顆粒，結(jié)構(gòu)清晰，著色明顯高于背景，陰

11、性對(duì)照無棕色反應(yīng)，正常細(xì)胞或繁殖細(xì)胞核為藍(lán)色。測(cè)定凋亡的神經(jīng)細(xì)胞陽性細(xì)胞數(shù)分級(jí)和陽性細(xì)胞顯色強(qiáng)度分級(jí)，計(jì)算凋亡細(xì)胞的免疫組化評(píng)分（IHS值）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明:
　　 ①止血方式不同時(shí)，各組IHS值存在明顯差異(P＜0.05)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且任兩組相互比較均存在差異(P＜0.05)。
　　 ②當(dāng)時(shí)間作為實(shí)驗(yàn)的影響因素，各時(shí)間點(diǎn)的IHS值存在差異(P＜0.05)，任兩組進(jìn)行比較時(shí)，除20d與25d標(biāo)本的IHS值

12、無差異外，其余各時(shí)間點(diǎn)的IHS值均存在差異（P＜0.05）。
　　 ③當(dāng)時(shí)間跟處理因素綜合考慮時(shí)，Surgicel止血后10d凋亡指數(shù)最高，空白組25天凋亡指數(shù)最低。
　　 ④并且時(shí)間與止血方式存在交互作用（P＜0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 1、作為神經(jīng)外科止血材料，Surgicel的組織相容性優(yōu)于吸收性明膠海綿。
　　 2、應(yīng)用止血材料會(huì)對(duì)細(xì)胞凋亡產(chǎn)生不同程度的影響。
　　 3、在保