當(dāng)歸多糖對(duì)小鼠造血干-祖細(xì)胞的動(dòng)員作用及移植后重建造血的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、當(dāng)歸作為中醫(yī)“補(bǔ)血、活iff"要藥已有數(shù)千年的臨床應(yīng)用歷史。現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)研究證明：當(dāng)歸化學(xué)成分復(fù)雜，當(dāng)歸多糖(Angelicapolysaccharides，APS)是其主要化學(xué)成份之一。既往研究發(fā)現(xiàn)：APS是當(dāng)歸中促進(jìn)造血的有效成分，APS對(duì)正?；蜇氀∈蟮乃柘翟煅婕?xì)胞(BFU-E、CFU-E、CFU-GM和CFU-MK)的增殖分化有顯著的促進(jìn)作用；同時(shí)APS在體外可促進(jìn)人紅系、粒單系及混合系造血組細(xì)胞的增殖分化，其作用機(jī)理可能是APS

2、通過(guò)促進(jìn)造血微環(huán)境中的基質(zhì)細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)和分泌GM-CSF、IL-3等造血生長(zhǎng)因子，從而促進(jìn)早期造血細(xì)胞的發(fā)生，調(diào)節(jié)血細(xì)胞的生成。但目前尚未見APS對(duì)造血干細(xì)胞動(dòng)員的研究報(bào)道。 近年來(lái)，造血干細(xì)胞移植(hematopoieticstemcelltransplantation，HSCT)在國(guó)內(nèi)外已得到廣泛開展，成為治療惡性血液病、多種實(shí)體瘤、部分遺傳性疾病、免疫缺陷病和以造血干細(xì)胞(hematopoieticstemcell，

3、HSC)為靶細(xì)胞的基因治療的有效方法。與骨髓移植相比，外周血干細(xì)胞移植(peripheralbloodstemcelltransplantation,PBSCT)因其具有采集安全方便、供者痛苦少、造血及免疫功能恢復(fù)快、受腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)或污染的機(jī)會(huì)較少、潛在的抗殘留病優(yōu)勢(shì)等優(yōu)點(diǎn)，正被臨床廣泛接受，有替代骨髓移植之趨勢(shì)。但在正常狀態(tài)下，外周血中造血干／祖細(xì)胞(hematopoieticstemprogenitorcell，HSPC)的數(shù)量很少

4、，只有骨髓含量的10A-10％左右，難以達(dá)到足夠數(shù)量以保證移植成功。因此，PBSCT成功的前提技術(shù)之一是如何將骨髓中的HSPC動(dòng)員到外周血中，以便采集到足夠數(shù)量的HSPC以保證移植后重建造血。目前以粒細(xì)胞集落刺激因子(granulocytecolony-stimulatingfactor，G-CSF)為代表的動(dòng)員劑體內(nèi)注射仍存在許多不足之處，動(dòng)員方案也有待優(yōu)化，所以尋找新的造血干細(xì)胞動(dòng)員劑或優(yōu)化動(dòng)員方案成為外周血造血干細(xì)胞移植領(lǐng)域的熱點(diǎn)

5、問(wèn)題之一。 本研究以BALB／c小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，分為兩個(gè)部分進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究：1．APS對(duì)小鼠造血干／祖細(xì)胞動(dòng)員作用的研究；2．APS動(dòng)員的造血干／祖細(xì)胞移植重建造血衰竭小鼠造血功能的研究。本研究旨在從祖國(guó)醫(yī)學(xué)寶庫(kù)中尋找安全、高效的造血干細(xì)胞動(dòng)員劑，促進(jìn)外周血干細(xì)胞移植的廣泛開展，為當(dāng)歸的臨床用藥和開發(fā)提供理論指導(dǎo)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 1.APS對(duì)小鼠造血干，祖細(xì)胞動(dòng)員作用的研究 目的：探討APS對(duì)小鼠HSPC的動(dòng)員作用

6、。 方法：首先應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法【正交表L25(56)]，篩選出APS的最佳給藥劑量和采血時(shí)間；將BALB／c小鼠隨機(jī)分為4組(NS組、APS組、rhG-CSF組、rhG-CSF+APS組)，采用外周血WBC、LC計(jì)數(shù)、免疫細(xì)胞化學(xué)、流式細(xì)胞術(shù)，造血祖細(xì)胞體外半固體培養(yǎng)等技術(shù)方法，研究APS對(duì)外周血WBC、LC數(shù)、外周血CD34+細(xì)胞百分率、混合集落形成單位(colony-formingunite-mix，CFU-Mix

7、)數(shù)的影響。 結(jié)果：1．篩選出APS的最佳給藥劑量為4mg／kg，采血時(shí)間為第8天。2．APS作用后小鼠外周血WBC、LC數(shù)明顯高于NS組(P