骨髓腔內(nèi)注射方式對(duì)造血干-祖細(xì)胞體內(nèi)造血功能恢復(fù)的影響.pdf

1、目的：研究表明骨髓腔內(nèi)注射(iBMI)可以促進(jìn)注射到骨髓腔內(nèi)的骨髓細(xì)胞(BMC)的歸巢及增殖分化。本研究旨在通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證iBMI方式能否改善或避免造血干/祖細(xì)胞(HS/PC)可能存在的體內(nèi)歸巢能力缺陷,提高造血干細(xì)胞移植(HSCT)的植入率,并縮短其造血功能恢復(fù)時(shí)間。 材料與方法：利用Ficoll-Hypaque密度梯度法從臍帶血(UCB)、動(dòng)員外周血(mPB)及骨髓(BM)中分離單個(gè)核細(xì)胞(MNC),并用免疫磁珠法分

2、選CD34+造血前體細(xì)胞,經(jīng)尾靜脈注射(iVI)及iBMI分別將純化的CD34+細(xì)胞移植到亞致死劑量照射的NOD/SCID小鼠體內(nèi)。于不同時(shí)間點(diǎn)(異種移植后第3、5及8周)聯(lián)合應(yīng)用以下三種方法計(jì)算人造血系統(tǒng)各系細(xì)胞植入率：(1)HPC集落分析：于接種后第7、10及14天計(jì)數(shù)爆式紅系集落形成單位(BFU-E)、粒-巨噬細(xì)胞集落形成單位(CFU-GM)及混合系集落形成單位(CFU-GEMM);(2)流式細(xì)胞術(shù)(FACS)：檢測(cè)人CD45、C

3、D34、CD33、CD14、CD19、CD56及CD41a于NOD/SCID受鼠造血微環(huán)境中的陽性細(xì)胞百分率；(3)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)：檢測(cè)人17號(hào)染色體α-衛(wèi)星特異性片段分子水平。通過免疫組化法檢測(cè)長(zhǎng)期存活受鼠體內(nèi)臟器的人HS/PC分布。通過二次移植實(shí)驗(yàn)比較長(zhǎng)期存活受鼠體內(nèi)HSC的自我更新能力。 結(jié)果:iBMⅠ組受鼠骨髓細(xì)胞各系集落BFU-E、CFU-GM及CFU-GEMM產(chǎn)率于各計(jì)數(shù)時(shí)間點(diǎn)均高于iVⅠ組；iBMI及iV

4、Ⅰ組移植的HS/PC均具有多向分化能力,且iBMⅠ組在重建長(zhǎng)期造血方面優(yōu)于iVⅠ組；在iVI及iBMⅠ組長(zhǎng)期存活受鼠肝臟、脾臟、肺臟、外周血、骨髓細(xì)胞中,可檢測(cè)到人17號(hào)染色體α-衛(wèi)星特異性片段；UCB-iBMI后第8周,應(yīng)用免疫組化法在受鼠的肝臟、脾臟和肺臟中均檢出人CD45抗原的表達(dá)；二次移植后第6周,iVI及iBMⅠ組受鼠各組織臟器均可檢出人17號(hào)染色體α-衛(wèi)星特異性片段的表達(dá)。 結(jié)論：與iVI相比,經(jīng)iBMI移植UCB-