骨髓間充質(zhì)干細胞對致敏小鼠造血干-祖細胞移植植入的影響及其相關(guān)實驗研究.pdf

1、目的：綜合評價骨髓間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cell，MSC)對致敏小鼠造血干/祖細胞移植植入的影響，先后進行了一系列研究：包括首先對致敏小鼠骨髓MSC進行體外培養(yǎng)后的形態(tài)學(xué)及功能評估，隨后是正常小鼠骨髓MSC在致敏小鼠體內(nèi)的歸巢示蹤實驗，以及小鼠MSC/MSC培養(yǎng)上清液對致敏小鼠脾淋巴細胞的增殖影響的體外實驗，最后是利用不同組合的MSC聯(lián)合造血干/祖細胞移植，觀察MSC對致敏小鼠造血干/祖細胞移植中移入的影響的動

2、物體內(nèi)實驗。
　　 方法：應(yīng)用貼壁培養(yǎng)法進行體外致敏/正常小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)，形態(tài)學(xué)觀察并利用流式法檢測培養(yǎng)細胞表面標志，同時進行成骨，成脂，成肌多向分化能力的檢測，全面對致敏和正常小鼠骨髓MSC的形態(tài)功能進行對比評估；隨后應(yīng)用綠色熒光顏料(羧基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺，CSFE)體外標志正常小鼠骨髓MSC后，經(jīng)尾靜脈注射到致敏小鼠體內(nèi)，分別利用冰凍切片及流式檢測法檢測在注射后6小時，24小時及48小時各主要臟器(包括外周

3、血，肝脾，骨髓，肺及腎等)標志了熒光顏料的細胞分布情況，借此了解MSC在致敏小鼠體內(nèi)歸巢情況；最后進行MSC對致敏小鼠造血干/祖細胞移植植入的影響實驗，具體包括體外實驗：應(yīng)用MTT法檢測混合淋巴細胞反應(yīng)，了解MSC/MSC培養(yǎng)上清液對致敏小鼠脾淋巴細胞增殖的影響；以及體內(nèi)實驗部分：不同組合的MSC干預(yù)設(shè)計，聯(lián)合致敏動物的異基因造血干/祖細胞移植，在移植后進行了相關(guān)觀察，其中包括生存分析，移植效果分析(包括血象改變，免疫功能的重建檢測，骨

4、髓細胞恢復(fù)及嵌合分析等)和移植物抗宿主病(graft versus host disease，GVHD)觀察，以便全面了解MSC對致敏動物異基因造血干/祖細胞移植植入的影響。
　　 結(jié)果：致敏小鼠骨髓MSC與正常小鼠MSC比較，形態(tài)學(xué)及功能方面未見明顯異常；體外正常小鼠骨髓MSC經(jīng)尾靜脈注射進入到致敏動物體內(nèi)后很快并持久地在致敏小鼠的肝脾等網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)聚集；體外實驗表明，正常小鼠骨髓MSC在體外能很好地抑制致敏小鼠脾淋巴細胞增殖

5、，同時MSC培養(yǎng)上清液也能觀察到類似現(xiàn)象；但在體內(nèi)實驗中，在本課題設(shè)計下的MSC聯(lián)合應(yīng)用異基因造血干/祖細胞移植未能促進2次異基因脾細胞注射的致敏動物模型的異基因骨髓造血干/祖細胞移植的植入，未能延長致敏動物移植后的生存時間。
　　 結(jié)論：利用異基因脾細胞注射方式致敏的小鼠，其骨髓MSC與正常小鼠的比較未見明顯異常。外源性MSC能經(jīng)尾靜脈注射方式很快并持久地在致敏小鼠體內(nèi)引起致敏反應(yīng)的內(nèi)皮網(wǎng)狀系統(tǒng)如肝脾等靶器官聚集。MSC能在體