共表達(dá)霍亂毒素B亞基的DNA疫苗的系統(tǒng)及粘膜佐劑活性研究.pdf

1、近年來針對(duì)HIV的疫苗研究中，包含DNA疫苗的組合應(yīng)用非常廣泛。DNA疫苗的一個(gè)固有缺陷就是相對(duì)傳統(tǒng)的蛋白疫苗以及病毒載體疫苗，其免疫原性較弱。在改造DNA疫苗的免疫原性的策略中，有一種方式就是將具有佐劑作用的活性物質(zhì)與抗原一同整合于質(zhì)粒載體中?；魜y毒素是霍亂弧菌產(chǎn)生的一種外毒素，是已知最強(qiáng)的粘膜免疫原，其全毒素以及A、B亞基都具有佐劑活性。
　　在本文中，我們嘗試將CTB亞基全長(zhǎng)基因和相應(yīng)抗原融合表達(dá)，制成相應(yīng)的DNA疫苗（以及

2、一些重組痘苗病毒）以及并檢測(cè)這些疫苗通過系統(tǒng)及粘膜兩種不同方式接種后，對(duì)于相應(yīng)部位的各種不同免疫反應(yīng)的影響。
　　1、共表達(dá)抗原與CTB的DNA疫苗在系統(tǒng)免疫中的免疫原性使用的疫苗為本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的TRIVN、CTB-TRIVN等DNA疫苗[1]，通過肌注免疫的方式，研究其佐劑活性。
　　研究的結(jié)果，在T細(xì)胞免疫反應(yīng)和體液免疫兩個(gè)方面，CTB-TRIVN的反應(yīng)都顯著強(qiáng)于單純TRIVN。共表達(dá)CTB與TRIVN的DNA疫苗在肌注

3、途徑具良好佐劑活性。
　　2、融合表達(dá)抗原與CTB的DNA疫苗在粘膜免疫中的佐劑活性在初步確定了融合表達(dá)抗原與CTB的DNA疫苗在傳統(tǒng)的注射型疫苗中的佐劑活性后，進(jìn)一步考察融合表達(dá)抗原與CTB的DNA疫苗的粘膜佐劑活性。
　　研究的結(jié)果:無(wú)論是在系統(tǒng)（脾細(xì)胞）還是在粘膜（近端、遠(yuǎn)端和腸系膜淋巴結(jié)），通過OVA-CTB rTTV加強(qiáng)的抗原特異性T細(xì)胞反應(yīng)均強(qiáng)于單純OVArTTV加強(qiáng)。而體液免疫方面則無(wú)顯著差異。
　　我們

4、還研究了抗原特異性T細(xì)胞表面有細(xì)胞遷移與歸巢相關(guān)分子表達(dá)狀況(α4β7與CCR9)，在各組之間沒有發(fā)現(xiàn)顯著差異。
　　本論文的主要意圖在于通過將CTB直接嵌入載體與抗原共表達(dá)的方式提高響應(yīng)DNA疫苗在系統(tǒng)及粘膜免疫途徑中的免疫原性。研究結(jié)果表明，CTB共表達(dá)的DNA疫苗通過肌注途徑免疫可以引發(fā)較良好的抗原特異性細(xì)胞及體液免疫反應(yīng);在粘膜免疫方面，通過DNA疫苗滴鼻初免+相應(yīng)重組痘病毒肌注加強(qiáng)的策略，新形式的疫苗+佐劑組合可以在系統(tǒng)