多柔比星聚羥基丁酸酯微球治療實(shí)驗(yàn)性增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變的研究.pdf

1、增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變是眼科多發(fā)病，它是由于孑L源性視網(wǎng)膜脫離、視網(wǎng)膜復(fù)位手術(shù)及眼穿通傷后玻璃體內(nèi)及視網(wǎng)膜表面的細(xì)胞增生和收縮，從而造成的牽引性視網(wǎng)膜脫離，嚴(yán)重的可導(dǎo)致失明。臨床上常用的治療手段為手術(shù)復(fù)位，但由于手術(shù)難以避免引起眼內(nèi)創(chuàng)傷，故術(shù)后仍有約30％的患者復(fù)發(fā)。研究表明，玻璃體內(nèi)灌注或注射抗代謝藥物多柔比星可顯著降低成纖維細(xì)胞增生和預(yù)防視網(wǎng)膜脫落。但是游離藥物眼內(nèi)毒性大，生物半衰期短，如要保持有效血藥濃度需頻繁注射。理想的給藥方式

2、是在手術(shù)治療后植入長(zhǎng)效的多柔比星給藥系統(tǒng)，既降低了藥物在眼內(nèi)的毒性，又增加了其治療時(shí)間。本課題以多柔比星為模型藥物，生物降解材料聚β-羥基丁酸酯(PHB)為材料，使用乳化．溶劑揮發(fā)法制備長(zhǎng)效緩釋微球，考察其體內(nèi)外的性質(zhì)、眼內(nèi)藥動(dòng)學(xué)和預(yù)防增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變的效果，為其進(jìn)一步的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。 本文采用乳化．溶劑揮發(fā)法制備多柔比星聚酯微球。通過考察投藥比(％，w/w)、有機(jī)相聚β-羥基丁酸酯濃度(％，w/w)、外水相聚乙烯醇濃

3、度(％，w/v)、攪拌速度(rpm)和攪拌時(shí)間(h)對(duì)微球成球性的影響，確定制備的基本工藝，并使用星點(diǎn)設(shè)計(jì)一效應(yīng)面優(yōu)化法優(yōu)化制備工藝。以影響微球性質(zhì)比較重要的投藥比、有機(jī)相聚β-羥基丁酸酯濃度和聚乙烯醇濃度為自變量，以載藥量、包封率、粒徑和跨距為因變量進(jìn)行多元線形回歸和二次多項(xiàng)式擬合。結(jié)果表明載藥量、包封率、粒徑和跨距均符合二次多項(xiàng)式擬合，其相關(guān)系數(shù)分別為0.9714、0.9250、0.9159和0.9076。根據(jù)因變量效應(yīng)面選擇的較佳

4、的工藝條件為投藥比為6％、有機(jī)相PHB濃度為50mg/ml、外水相PVA濃度為6.5％，所得微球形態(tài)圓整，載藥量、包封率、平均粒徑和跨距分別為：1.01％、16.79％、43μm和1.45％，與方程預(yù)測(cè)值的偏差分別為5.94％、1.43％、-7.42％和5.52％，表明所建立的模型預(yù)測(cè)性良好。 對(duì)根據(jù)較優(yōu)條件所得的微球的性質(zhì)進(jìn)行考察，包括差示掃描熱分析，微球滅菌實(shí)驗(yàn)以及滅菌前后載藥量、包封率、粒徑、跨距和體外溶出度的變化，微球的

5、體內(nèi)外降解性等。差示掃描熱分析表明藥物可能以結(jié)合形式被包裹在微球內(nèi)部，微球表面吸附的藥物量較少；滅菌實(shí)驗(yàn)表明以劑量為9kGy的γ射線照射微球能夠獲得較好的滅菌效果，同時(shí)滅菌前后微球性質(zhì)基本不變，滅菌劑量低于6kGy時(shí)，滅菌后仍有菌落檢出，當(dāng)滅菌劑量大于12kGy時(shí)材料和藥物的性質(zhì)有改變；體外釋放實(shí)驗(yàn)證實(shí)微球體外釋放呈現(xiàn)三個(gè)不同階段，60d累計(jì)釋放率達(dá)65％，并能夠進(jìn)一步釋放藥物：微球的體內(nèi)外降解實(shí)驗(yàn)表明其降解過程是一個(gè)由外向內(nèi)的不均勻的

6、降解過程，微球表面降解速度大于核心的降解速度。 兔眼玻璃體內(nèi)注射多柔比星微球后，采用反相高效液相色譜法測(cè)定各組織中藥物的濃度。具體條件：DiamonsilCis色譜柱(250mmx4．6mm，5gm)，流動(dòng)相：乙腈：0．2mol／L磷酸二氫鉀(含0．2％三乙胺，磷酸調(diào)pH到4．0)=30：70；檢測(cè)波長(zhǎng)234nm：內(nèi)標(biāo)為柔紅霉素；甲醇沉淀蛋白，固相萃取富集樣品。結(jié)果表明在兔眼各組織中，多柔比星和內(nèi)標(biāo)保留時(shí)間合適，分離效果良好；在

7、0．1～lOgg／ml的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r>0．999；各組織中日內(nèi)與日間精密度分別小于3．70％和3．39％，低、中、高濃度，各組織回收率接近100％，提取率、定量限和檢測(cè)限均符合要求，所建立的測(cè)定兔眼各組織中多柔比星含量的液相方法準(zhǔn)確可靠。 玻璃體內(nèi)單劑量注射含藥微球后發(fā)現(xiàn)，藥物在玻璃體中能夠維持60d的有效濃度，在虹膜和鞏膜中能夠維持45d的有效濃度，在視網(wǎng)膜和脈絡(luò)膜中能夠維持30d的濃度，而對(duì)照的多柔比星溶液組在

8、12h時(shí)，各個(gè)組織的藥物濃度就低于檢測(cè)限。含藥微球組眼內(nèi)各個(gè)組織的藥時(shí)曲線下面積較對(duì)照溶液組有較大的提高，而微球組中低劑量和高劑量生物等效。同時(shí)發(fā)現(xiàn)藥物在視網(wǎng)膜和脈絡(luò)膜中濃度最大，是由于視網(wǎng)膜和脈絡(luò)膜解剖學(xué)上最靠近玻璃體的緣故。 兔眼玻璃體注射巨噬細(xì)胞，制備了增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變的模型；玻璃體內(nèi)注射低、中、高濃度的含藥微球懸液作為治療組，分別注射相同劑量的低、中、高濃度的多柔比星溶液和空白微球作為對(duì)照組，考察了各個(gè)制劑對(duì)增殖性