一氧化氮對豬腔前卵泡生長發(fā)育影響的研究.pdf

1、在哺乳動物卵巢上，只有極少數(shù)卵泡能充分發(fā)育成熟并排卵，而大量的卵泡在發(fā)育到有腔卵泡前發(fā)生閉鎖退化。從某種意義上說，這是對遺傳資源的極大浪費(fèi)。研究和利用這部分資源，具有重要的理論和現(xiàn)實(shí)意義。近年來，一氧化氮 (nitric oxide，NO)作為一種信號分子在哺乳動物生殖系統(tǒng)中的重要作用逐漸被認(rèn)識，其中與卵母細(xì)胞的生長發(fā)育及其調(diào)控密切相關(guān)。但NO對腔前卵泡生長發(fā)育的影響卻很少有報(bào)道。本論文用體外培養(yǎng)豬腔前卵泡的方法，分別用 NO 供體硝普

2、鈉 (sodiumnitroprusside，SNP) (0mmol.L、0.001 mmol/L、0.01mmol/L、0.1 mmol/L和1 mmol/L)，一氧化氮合酶 (nitric oxide synthase，NOS) 底物精氨酸(L-Arg，6001μmol/L)、NOS抑制劑硝基精氨酸(N<,w>-Nitro-L-arginine，L-NNA)(1mmol/L)或硝基精氨酸甲基酯(N<,w>-Nitro-L-argin

3、ine methyl ester，L-NAME) (1mmol/L)處理，觀察其存活、基底膜完整性、形態(tài)、成腔及直徑變化等情況，并研究培養(yǎng)后卵泡中卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體(cumulus oocyte complex，COC)的回收、卵母細(xì)胞的發(fā)育和雌二醇(E<,2>)及孕酮(P)分泌情況。 1.體外培養(yǎng)的腔前卵泡直徑逐漸增加，但SNP各處理組卵泡在培養(yǎng)過程中相互之間直徑變化差異不顯著(P>0.05)；L-ARG+L-NNA組卵泡直徑在

4、培養(yǎng)第4天顯著高于L-NNA、L-NAME和L-ARG+L-NAME組(275μm vs258μm，254μm，258μm，P<0.05)。第6天時的卵泡直徑的變化與第4天相似，并且L-ARG+L-NNA組顯著高于兩種抑制劑組(P<0.05)。 2.體外培養(yǎng)后，各處理組間卵泡存活率存在差異，1mmol/LSNP組卵泡存活率顯著低于0.001mmol/LSNP組(61.6％vs81.5％，P<0.05)；培養(yǎng)第2天，對照組、L-AR

5、G組和L-ARG+L-NNA組卵泡存活率顯著高于L-NNA、L-NAME和L-ARG+L-NAME組(P<0.05)；L-ARG、L-ARG+L-NNA組卵泡存活率在培養(yǎng)第4天顯著高于L-NNA和L-ARG+L-NAME組(P<0.05)，培養(yǎng)第6天對照組、L-ARG和L-ARG+L-NNA組卵泡存活率顯著高于L-NNA和L-NAME組(P<0.05)，且L-ARG+L-NAME組卵泡存活率顯著高于L-NAME組(66.6％vs 51.

6、9％，P<0.05)。 3.在體外培養(yǎng)后期，1mmol/L SNP組的基底膜完整性顯著低于0.001mmol/L SNP組和對照組(第4天：61.8％vs90.9％，85.5％，P<0.05；第6天： 55.2％vs87.6％，77.1％，P<0.05)；L-NAME組卵泡基底膜完整率在培養(yǎng)第4天顯著低于對照組、L-ARG組、L-ARG+L-NNA組和L-ARG+L-NAME組(68.7％vs82.3％，81.1％，84.9％，8

7、1.8％，P<0.05)；L-ARG組在培養(yǎng)第6天顯著高于L-NNA組、L-NAME組、L-ARG+L-NNA組和L-ARG+L-NAME組(P<0.05)。 4.在培養(yǎng)后期，1mmol/L SNP組卵泡形態(tài)正常率顯著低于對照組和0.001mmol/L SNP組(第4天：54.9％vs73.8％，71.8％，P<0.05；第6天：45.2％vs60.6％，68.8％，P<0.05)。此外，0.1 mmol/L SNP組在培養(yǎng)第6天

8、顯著低于0.001 mmol/L SNP組(P<0.05)；L-NAME組形態(tài)正常率在培養(yǎng)前4天顯著低于對照組、L-ARG組和L-ARG+L-NAME組(P<0.05)；兩種抑制劑組在培養(yǎng)第6天與其它各處理組相比都顯著降低了卵泡形態(tài)正常率(P<0.05)；與對照組相比，L-Arg可以顯著逆轉(zhuǎn)L-NNA和L-NAME對卵泡形態(tài)正常率的抑制作用(P<0.05)。 5.體外培養(yǎng)4天時，SNP處理組中以0.001mmol/L成腔率(50％

9、)最高，第6天時0.001mmol/LSNP組成腔率顯著高于0.1和1 mmol/L SNP組(73.1％vs50.0％，47.6％，P<0.05)；L-ARG組與對照組在培養(yǎng)第4天顯著高于L-NNA、L-NAME和L-ARG+L-NAME組(27.5％，28.5％vs12.6％，13.2％，16.8％，P<0.05)；另外，L-ARG組與對照組在培養(yǎng)末期均顯著高于具有抑制劑組的，無論是否存在L-Arg(P<0.05)。 6.培養(yǎng)

10、結(jié)束后卵泡中的卵母細(xì)胞，其形態(tài)正常率，1mmol/L SNP組顯著低于0.001 mmol/L SNP組(P<0.05)，其余各組間差異不顯著(P>0.05)，但以0.001 mmol/L SNP組卵母細(xì)胞正常率最高，為71.21％；與L-ARG組相比，L-NNA和L-NAME組顯著降低了卵母細(xì)胞形態(tài)正常率(58.4％vs33.5％，35.6％，P<0.05)；此外，L-Arg可以顯著逆轉(zhuǎn)L-NNA的抑制作用(P<0.05)，但只能部分

11、逆轉(zhuǎn)L-NAME抑制卵母細(xì)胞正常率的作用(P>0.05)；培養(yǎng)結(jié)束后，SNP各處理組COC回收率分別為22.9％、37.3％、25.6％、20.7％和19.4％，0.001 mmol/L SNP組COC回收率顯著高于包括對照組的其余各處理組(P<0.05)；與對照組相比，L-Arg可以顯著逆轉(zhuǎn)L-NNA和L-NAME對COC回收率的抑制(21.7％vs11.9％，8.9％，P<0.05)。 7.對照組E2水平在培養(yǎng)第4天時顯著高于

12、各SNP處理組(P<0.05)；第6天除0.001mmol/L SNP與對照組沒有顯著差異外(P>0.05)，對照組顯著高于其它各組(P<0.05)，且隨SNP濃度的升高E<,2>濃度表現(xiàn)下降；1mmol/L SNP組P濃度在培養(yǎng)第4天顯著高于對照組、0.001和0.01mmol/L SNP組(P<0.05)；第6天時，對照組P濃度顯著低于各SNP處理組(P<0.05)，并隨著SNP濃度的升高P水平呈劑量依賴性提高。 研究結(jié)果表明