利用RNAi在整體水平上研究附睪特異性表達(dá)新基因的功能.pdf

1、附睪是精子儲存、運輸、成熟的關(guān)鍵場所。對附睪中的功能基因進行細(xì)致深入地研究，將有助于揭示雄性生殖及其調(diào)控特別是精子成熟調(diào)節(jié)的分子機制，為解決精子成熟異常所引起的不育、不孕癥提供分子水平的信息。同時，還可以為男性不育癥的診斷和治療、性傳播疾病的防治等方面提供一系列新的藥靶位點。 本文利用 RNAi 技術(shù)在整體水平上探討小鼠附睪頭部特異性表達(dá)新基因mLCN16 和大鼠附睪尾部特異性表達(dá)新基因HongrES1的生物學(xué)功能。 建

2、立了篩選靶基因siRNA的細(xì)胞模型，并利用此模型成功篩選到兩條針對mLCN6的 siRNA，干擾效率在8596以上。將其注射到小鼠附睪頭部，mRNA 水平上的干擾效率在50％左右，并且初步結(jié)果表明，精子運動能力有下降的趨勢，提示mLCN6 可能參與精子運動。 利用建立的細(xì)胞模型，篩選到兩條針對HongrES1的siRNA，mRNA和蛋白水平上的干擾效率均在95％以上。整體水平上，用化學(xué)合成的這兩條siRNA局部電轉(zhuǎn)注射大鼠附睪尾

3、部，結(jié)果表明，HongrES1的表達(dá)被顯著敲低，精子表面上HongrES1 蛋白結(jié)合減少，精子獲能明顯增加，而運動和頂體反應(yīng)沒有變化。將干擾后的雄性大鼠與正常雌性大鼠進行交配，胎兒和產(chǎn)仔數(shù)量均下降。顯示HongrES1 具有抑制精子獲能保護正常生育的功能。在體外，用HongrES1多克隆抗血清與附睪尾部精子共孵育發(fā)現(xiàn)HongrES1抗血清能夠顯著促進精子獲能，而對精子的運動和頂體反應(yīng)沒有影響，從而間接地驗證了HongrES1有抑制精子獲