分子分型方法在結核分枝桿菌復合群分離株中的研究和應用.pdf

1、目的： 1.建立快速鑒定結核分枝桿菌復合群(MTBC)菌種的方法。 2.建立Spoligotyping和VNTR兩種MTBC分離株基因分型方法，評價其應用價值及在我國應用的可行性。 方法： 1.將7對MTBC各菌種特異性引物(Mtbc1-7)進行聚合酶鏈反應(PCR)，通過對擴增產(chǎn)物的不同帶型進行分析，對已知標準株和96株臨床分離株進行菌種鑒定。 2.將被鑒定的結核分枝桿菌菌株進行Spoligot

2、yping和VNTR兩種分型，其結果進行比較。 結果： 1.用3株MTBC標準株，9株非分枝桿菌標準株以及27株非結核分枝桿菌(NTM)標準株對7對MTBC各菌種特異性引物進行特異性鑒定，結果證明引物Mtbc1能鑒定出分枝桿菌和非分枝桿菌；引物Mtbc2能鑒定出NTM和MTBC；引物Mtbc3能鑒定出微小分枝桿菌；引物Mtbc4能從MTBC中識別出牛分枝桿菌和卡介苗；引物Mtbc5能鑒定出非洲分枝桿菌Ⅱ型和結核分枝桿菌；

3、引物Mtbc6和引物Mtbc4結合能鑒定出卡介苗；引物Mtbc7和引物Mtbc5聯(lián)合能鑒定出M.canettii分枝桿菌。96株臨床分離株經(jīng)7對引物擴增，擴增結果顯示NTM20株，牛分枝桿菌1株，卡介苗1株，M.canettii分枝桿菌3株，微小分枝桿菌3株，非洲分枝桿菌1型3株，M.caprae分枝桿菌1株，結核分枝桿菌或非洲分枝桿菌Ⅱ型64株。 2.用Spoligotyping方法對59株結核分枝桿菌菌株進行基因分型，得到1

4、1種基因型，其中49株屬北京基因型菌株，而用VNTR分型方法可將這些菌株分為53種基因型。49株北京基因型菌株可以分為43種不同的VNTR基因型。10個VNTR位點的多態(tài)性分析表明各位點有較大的區(qū)別，其中8個位點顯示了較高的多念性，2個位點顯示了中等程度的多態(tài)性。 結論： 1.應用PCR技術鑒定MTBC菌種結果準確可靠，且具有簡便和快速等優(yōu)點，有較大的分子流行病學應用價值。 2.Spoligotyping分型法只