動脈粥樣硬化大鼠動脈組織的基因芯片分析及組織蛋白酶D的表達.pdf

1、目的：
　　運用基因芯片技術(shù)分析動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）大鼠與正常大鼠動脈組織中的差異性表達基因，篩選其中與細胞外基質(zhì)（Extracellular matrix，ECM）代謝相關(guān)的基因，探討ECM與AS發(fā)病的關(guān)系。
　　觀察ECM代謝相關(guān)基因中組織蛋白酶D（cathepsin D，CathD）在AS大鼠動脈組織中的分布及表達水平，研究其在AS發(fā)病中的作用。
　　方法：
　　（1）以高脂

2、飼料（3％膽固醇、0.5％膽酸鈉、5％精制糖、10％豬油及81.5％基礎(chǔ)飼料）喂養(yǎng)加維生素D3腹腔注射法建立SD大鼠AS模型；
　?。?）實驗第14周末，檢測大鼠血清總膽固醇（total cholesterol，TC）及甘油三酯(triglyeride，TG），進行主動脈、冠狀動脈HE及油紅O染色；
　?。?）提取主動脈組織RNA，應(yīng)用基因芯片技術(shù)分析差異性表達基因，根據(jù)基因芯片結(jié)果篩選與ECM代謝相關(guān)的基因CathD，以免

3、疫熒光及免疫印跡法檢測CathD在動脈組織中的分布情況及表達水平。
　　結(jié)果：
　　（1）以高脂飲食加腹腔注射維生素D3的方法成功建立了大鼠AS模型。14周時模型組TG和TC均較對照組明顯升高（P<0.01）；HE染色可見模型組大鼠主動脈內(nèi)皮細胞排列紊亂，部分脫落，中膜平滑肌細胞、纖維組織增生伴點狀或片狀鈣化，彈性纖維層結(jié)構(gòu)不清，形成纖維增生性動脈粥樣硬化病變。模型組主動脈、冠狀動脈油紅O染色可見內(nèi)皮下橙紅色脂質(zhì)沉積。對照組

4、動脈組織未見明顯異常。
　?。?）采用覆蓋20500個大鼠基因的Oligo基因芯片，結(jié)果顯示有1728個基因發(fā)生差異性表達，其中1218條基因表達下調(diào)，510基因表達上調(diào)，這些差異性表達基因分別與炎癥、脂代謝、氧化應(yīng)激、細胞凋亡等相關(guān)。其中可能與ECM代謝相關(guān)的基因有162條，表達上調(diào)的包括：血小板反應(yīng)素、骨橋蛋白、基底膜蛋白多糖、MMp－11，CathB、L、D、Y細胞因子及炎癥因子（TNF-α）等；表達下調(diào)的包括：生長因子（T

5、GF-β），CystatinC，MMp－2、16、23，絲氨酸蛋白酶抑制劑等。
　?。?）免疫熒光檢測發(fā)現(xiàn)AS組大鼠動脈組織中紅色熒光標記的CathD表達增加，主要分布在動脈內(nèi)膜、中膜，在增厚的中膜中表達增高更明顯。在對照組表達較少或不表達，主要分布于內(nèi)膜及中膜。Western-blot檢測提示：與對照組比較，AS組大鼠動脈組織CathD蛋白增加（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　?。?）通過高脂飼料加維生素D3腹腔注射