1型糖尿病對(duì)兔心梗后心臟神經(jīng)萌芽的影響及其作用機(jī)制初步探討.pdf

1、目的： 觀察T1DM 聯(lián)合急性MI模型家兔心臟各個(gè)部位交感神經(jīng)萌芽表達(dá)，并測(cè)定血清氧化應(yīng)激指標(biāo)濃度。探討T1DM對(duì)兔MI后交感神經(jīng)萌芽的影響；并初步探討交感神經(jīng)萌芽的發(fā)生機(jī)制，為臨床更好的防治SCD提供理論基礎(chǔ)和治療策略。 方法： 1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇及分組：40只健康家兔(體重1.9～2.8Kg)適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分4組，分別為正常對(duì)照組(NC)組、單純T1DM(DM)組、單純MI(MI)組和T1DM和MI復(fù)合模

2、型(DM+MI)組，全部動(dòng)物均用普通飼料飼養(yǎng)。 2、動(dòng)物模型制作：DM組和DM+MI組于分組后正式喂養(yǎng)1周末，禁食不禁水12小時(shí)后，按40mg/Kg耳緣靜脈注射四氧嘧啶溶液，造T1DM模型；MI組和NC 組耳緣靜脈注射相應(yīng)體積的無(wú)菌檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(PH4.4)。MI組和DM+MI 組成模后第6周末開胸行心臟冠狀動(dòng)脈左前降支上段結(jié)扎術(shù)，造心梗模型。DM組和NC組以同樣的方法行假手術(shù)。 3、動(dòng)物處死及免疫組化：各組家

3、兔于術(shù)后第1周末以耳緣靜脈注靜空氣(約50ml)的方法處死。處死后立即于原切口處開胸，取出心臟；在顯微鏡下對(duì)HE染色的心肌組織切片進(jìn)行組織學(xué)觀察；用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)心肌GAP-43和TH陽(yáng)性的神經(jīng)纖維，并用圖像分析軟件進(jìn)行分析，計(jì)算出GAP-43和TH陽(yáng)性神經(jīng)纖維的相對(duì)密度。 4、血清檢測(cè)：各組家兔分別于分組后第一周和術(shù)后處死前1天從耳緣靜脈取血并分離出血清，凍存于-70℃超低溫冰箱待測(cè)；采用氧化應(yīng)激指標(biāo)試劑盒子檢測(cè)各組血清

4、MDA、SOD的濃度和GSH-PX的活力。 結(jié)果： 1、MI組和NC組經(jīng)喂養(yǎng)后體重稍增重，而DM組和DM+MI組成模后體重下降，于第8周末四組家兔的體重比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 2、經(jīng)注射四氧嘧啶后DM組和DM+MI組家兔出現(xiàn)多飲、多尿等癥狀。10天后復(fù)查血糖，DM組和DM+MI組全部家兔空腹血糖值均在16.7mmol/L以上，而MI組和NC組血糖無(wú)明顯變化。最終DM組成模9只，DM+MI組初步成模

5、8只；MI組和DM+MI組各有7只家兔成功造模成功，手術(shù)成功率分別為87.5％和77.8％，兩組相比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 3、MI后形態(tài)學(xué)改變和交感神經(jīng)萌芽情況：HE染色顯示術(shù)后一周，心肌細(xì)胞可出現(xiàn)灶狀凝固性壞死及細(xì)胞空泡變性。NC組中GAP-43陽(yáng)性和TH陽(yáng)性的神經(jīng)纖維呈非均態(tài)的分布，并且相同部位的切片顯示，TH陽(yáng)性神經(jīng)與GAP-43陽(yáng)性的神經(jīng)部位存在重疊，提示為同一神經(jīng)，顯示萌芽的神經(jīng)為主要是交感神經(jīng)。

6、4、MI和T1DM對(duì)家兔心臟神經(jīng)萌芽的影響：MI和T1DM對(duì)家兔心臟交感神經(jīng)萌芽都有影響。MI使GAP-43和TH陽(yáng)性的神經(jīng)纖維密度增高，T1DM 使GAP-43 和 TH 陽(yáng)性的神經(jīng)纖維密度降低。兩者存在交互作用，兩者共同作用使DM+MI組的GAP-43和TH陽(yáng)性的神經(jīng)纖維密度明顯高于MI組。 5、不同部位神經(jīng)萌芽的比較：MI組不同部位GAP-43和TH陽(yáng)性的神經(jīng)纖維密度明顯不同，其差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。組

7、間兩兩比較顯示，無(wú)論是GAP-43還是TH陽(yáng)性的神經(jīng)纖維密度均明顯不同，并且其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.001)。GAP-43陽(yáng)性的神經(jīng)纖維密度的高低依次為：IBZ>SP>RV>IZ，TH陽(yáng)性的神經(jīng)纖維密度高低依次為：IBZ>SP>RV>IZ。 6、各組家兔氧化應(yīng)激指標(biāo)測(cè)定結(jié)果：與NC組相比較，DM組和MI組家兔血清。MDA濃度均明顯增大(P均<0.001)，而血清SOD濃度及GSH-PX活力明顯降低(P均<0.001)。MI

8、和T1DM對(duì)血清MDA、SOD的值的影響存在交互作用，兩者共同使血清MDA值升高，使SOD、GSH-PX值降低。 7、Pearson直線相關(guān)分析顯示，術(shù)后一周DM+MI組家兔心臟IBZ的GAP-43陽(yáng)性的神經(jīng)密度與血清MDA的濃度呈明顯的正相關(guān)，而與血清SOD、GSH-PX的值呈明顯的負(fù)相關(guān)；而相同部位的TH陽(yáng)性的神經(jīng)密度與血清MDA的濃度呈明顯的正相關(guān)，而與血清SOD、GSH-PX的值呈明顯的負(fù)相關(guān)(P<0.05或P<0.01