使用向肌細胞誘導分化的大鼠骨髓間充質干細胞復合藻酸鈣凝膠注射治療壓力性尿失禁的實驗研究.pdf

1、目的：
　　壓力性尿失禁(Stressurinaryincontinence,SUI)是女性泌尿外科常見疾病之一,嚴重地影響中老年女性的健康及生活質量。我們擬在大鼠動物模型上,使用向肌細胞分化誘導的骨髓問充質干細胞(Bonemarrowderiredmesenchymalstemcells,BMSCs)復合藻酸鈣凝膠(CalciumAlginate)注射于尿道周圍組織,以提高尿道阻力,并憑借誘導后干細胞的分化、增殖來修復退變的尿道

2、括約肌組織。本實驗作為研究課題的第二部分,研究目的在于建立可操作、穩(wěn)定的大鼠壓力性尿失禁動物模型,并評估向肌細胞分化誘導的骨髓間充質干細胞復合藻酸鈣凝膠治療壓力性尿失禁的效果。
　　材料和方法：
　　第一部分，大鼠壓力性尿失禁模型的建立和效果評價:
　　將18只6周齡雌性SD大鼠(體重范圍190～220g)隨機分成3組:模型組,假手術組及對照組。對模型組大鼠作雙側陰部神經及盆底神經肌支截斷,假手術組分離暴露上述神經但不

3、作截斷,對照組大鼠不作特殊處理。術后2周以測定發(fā)生漏尿時的尿道內壓力的方法評估3組大鼠的漏尿點壓力(Leakpointpressue,LPP)并作統(tǒng)計學分析。壓力測定后取正常大鼠及模型大鼠的尿道橫截面作組織學比較。
　　第二部分，大鼠骨髓間充質干細胞及誘導后的肌樣細胞治療壓力性尿失禁的實驗研究:
　　從2周齡SD大鼠長骨骨髓中分離提取骨髓間充質干細胞,在體外培養(yǎng)增殖。以5-氮雜胞苷10umol/L作用于P2代大鼠骨髓間充質干

4、細胞24小時,誘導其向肌細胞分化,繼續(xù)培養(yǎng)3周后備用。將108只6周齡雌性SD大鼠(平均個體質量205.36±10.60g)平均分為6組,首先全部以切斷雙側陰部神經及盆底神經肌支的方法建立壓力性尿失禁模型,術后2周時6組大鼠作分別處理:干細胞懸液組于膀胱頸尿道移行部2點、10點處注射大鼠骨髓間充質干細胞懸液,每點20ul;肌細胞懸液組于同樣部位同樣劑量注射肌樣細胞(經向肌細胞分化誘導的骨髓間充質干細胞)懸液;同法,單純凝膠組注射單純藻酸

5、鈣凝膠,干細胞凝膠組注射骨髓問充質干細胞復合藻酸鈣凝膠,肌細胞凝膠組注射肌樣細胞復合藻酸鈣凝膠。而空白對照組在解剖游離膀胱頸后不作注射。
　　將每組18只大鼠再分為3小組,分別于1周、4周、8周時間點測定漏尿點壓力,作統(tǒng)計學分析。取4周、8周大鼠的尿道橫截面作HE和Desmin染色作組織學比較。
　　結果：
　　第一部分:假手術組1只大鼠于術后1周死亡。余大鼠皆存活并順利測定漏尿點壓力。與正常大鼠相比,模型組大鼠平均漏

6、尿點壓力顯著下降(P=0.001),而假手術組大鼠與對照組大鼠平均漏尿點壓力無明顯差異(P=0.706)。組織學檢查顯示,與正常大鼠比較,模型組大鼠尿道橫紋肌排列致密性較差,而肌纖維也出現(xiàn)一定的萎縮。
　　第二部分:首先對比了首次測量與二次測量測得的漏尿點壓力,發(fā)現(xiàn)二者均值有差異,但沒有統(tǒng)計學意義(P=0.092)。因而采用兩次測量平均值計算,評估不同組間平均漏尿點壓力的差異。結果發(fā)現(xiàn)空白對照組與單純凝膠組(P=0.007),干細

7、胞復合凝膠組(P=0.014)和肌細胞復合凝膠組(P=0.003)在平均漏尿點上有顯著性差異,而與干細胞懸液組、肌細胞懸液組無顯著性差異?？瞻讓φ战M各時間點測得的平均漏尿點壓力無顯著差異。組織學檢查發(fā)現(xiàn)各組尿道橫截面標本在括約肌密度、肌肉纖維粗細上未發(fā)現(xiàn)明確的差異。單純凝膠組、干細胞凝膠組及肌細胞凝膠組4周、8周標本在連續(xù)切片中均發(fā)現(xiàn)了凝膠聚集區(qū)域,HE染色下3組凝膠形態(tài)相似,Desmin染色下單純凝膠組較其他兩組Desmin陽性表達明

8、顯減弱,Desmin染色下單純凝膠組的弱陽性表達與凝膠和染色劑粘附有關。各組4周與8周標本相比未見明顯差異。
　　結論：
　　通過切斷雙側陰部神經和盆底神經肌支,可建立穩(wěn)定的、較接近壓力性尿失禁的動物模型。
　　使用凝膠(單純凝膠或復合細胞凝膠)注射于尿道周圍可以提高壓力性尿失禁模型大鼠的漏尿點壓力,但壓力性尿失禁模型大鼠的漏尿點壓力的提高與凝膠體積效應相關度大。
　　在注射后8周時,經5-氮雜胞苷誘導的骨髓間充