腫瘤組織中Midkine的高效檢測及其新剪切型的發(fā)現(xiàn).pdf

1、廈門大學(xué)碩士學(xué)位論文腫瘤組織中kine的高效檢測及其新剪切型的發(fā)現(xiàn)姓名：陶萍申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：李博安李智星20061201摘要性腫瘤組織中都有很高的表達(dá)，(2)而且MK的截短型(truncated，tMK)在癌細(xì)胞系惡性腫瘤組織中達(dá)到100％的檢出率(先前的檢出率僅60％左右)。已有不少研究表明，tMK是一種缺少外顯子III編碼的N結(jié)構(gòu)域及其周圍序列的MK變異體，具有腫瘤特異性。tMK被普遍認(rèn)為參與腫

2、瘤的發(fā)生和發(fā)展，并因其在人類組織中的表達(dá)僅限于癌癥組織而被認(rèn)為可以作為檢測癌癥的一種有效的標(biāo)志。因此，我們的實驗中這種簡單易行的方法，大大提高了tMK成為一個有效可行的癌癥臨床診斷標(biāo)志物的可行性；(3)在肝癌手術(shù)的癌旁組織中發(fā)現(xiàn)有MK的高表達(dá)和tMK的表達(dá)，這與免疫組化的結(jié)果一樣都證明了MK在癌癥的發(fā)生、轉(zhuǎn)移和侵入中起到了重要的作用，因此MK及其tMK具有可開發(fā)為癌癥的早期檢測標(biāo)志物的可能性，這對于癌癥腫瘤的有效檢測與治療都是非常有利的

3、；(4)隨后，用同樣的技術(shù)，由于靈敏度和專一性的提高，我們首次發(fā)現(xiàn)了在人癌癥組織及其癌細(xì)胞中，MK的另外兩種新截短型，分別稱tMKB和tMKC。之前己經(jīng)發(fā)現(xiàn)并報道過的這種截短型稱tMKA。它們的mRNA大dN序是：tMKAtMKBtMKC。值得一提的是，之前在小鼠胚胎中也發(fā)現(xiàn)MK的三種截短型，其剪切形式與本文中的三種人類tMK十分相似；而疾病中的tMK又有明顯變異。這可能為研究MK在病變中的功能，提供重要線索；(5)一個顯著的特點是，這

4、些tMK的剪切位點序列具有特異性，3’和5’端剪切位點堿基序列完全相同，如3’和5’端剪切位點序列都為ACCCCC。有趣的是這與之前在小鼠胚胎中發(fā)現(xiàn)的3種新的tMK是類似的剪切模式，也是具有此類序列專一性的mRNA剪切模式：這提示著，可能存在一種新型的mRNA剪切模式：(6)從基因結(jié)構(gòu)上比較，tMKA缺失了整個外顯子III，tMKB缺失了整個外顯子III和IV的一部分，tMKC缺失了外顯子III和IV的各一部分。對比之前在小鼠胚胎中也發(fā)

5、現(xiàn)的三種tMi，可能為挖掘MK在正常發(fā)育和病變中的分子機制，提供新思路；(7)最后，我們運用實時定量(RealTime)PCR的方法，發(fā)現(xiàn)MK及tMK的表達(dá)量與腫瘤／癌癥發(fā)生在量上的相關(guān)性，即MK，tMK在正常，病變前期和疾病組織中表達(dá)量的相關(guān)性：不僅進(jìn)一步確證了，MK表達(dá)與疾病的關(guān)系，并為將來從量上，可能把MK、tMK表達(dá)量的檢測用于臨床上診斷疾病的嚴(yán)重程度，提供有利的數(shù)據(jù)?？偨Y(jié)這方面的研究，我們不僅優(yōu)化檢測技術(shù)，使之更加靈敏，從而可