BMP-2、TGF-β3雙基因修飾質(zhì)粒在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)及對(duì)增殖活性的影響.pdf

1、目的:本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)陽(yáng)離子脂質(zhì)體包埋BMP-2、TGF-β3雙基因修飾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,觀(guān)察BMP2及TGFβ3在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)及對(duì)細(xì)胞增殖活性的影響,為下一步研究雙基因表達(dá)載體對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化影響奠定基礎(chǔ)。
　　 方法:全貼壁法培養(yǎng)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,進(jìn)行原代和傳代培養(yǎng),取P2代細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染,分別將plRES/BMP-2、pIRES/TGFβ3、pIRES/BMP2-TGFβ3及空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入干細(xì)胞,并設(shè)置空白對(duì)照組,

2、轉(zhuǎn)染兩天后RT-PCR檢測(cè)各組BMP2及TGFβ3的表達(dá)情況,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn),計(jì)算細(xì)胞倍增時(shí)間,比較各組干細(xì)胞的增殖情況。
　　 結(jié)果:pIRES/BMP2-TGFβ3轉(zhuǎn)染組BMP2及TGFp3mRNA含量高于單基因組及空白對(duì)照組(p＜0.05),雙基因均可獲得穩(wěn)定表達(dá);雙基因組細(xì)胞倍增時(shí)間較單一組及空白對(duì)照組明顯縮短(p＜0.05),雙基因組具有良好的促進(jìn)BMCs增殖作用。
　　 結(jié)論:雙基因修飾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染干細(xì)胞可以再