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文檔簡(jiǎn)介
1、目的：(1)培養(yǎng)轉(zhuǎn)染所需兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)。(2)通過(guò)采用陽(yáng)性脂質(zhì)體pcDNA3.1(-)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染到BMSCs方法，獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的BMSCs細(xì)胞。(3)使用免疫組化、WesternBlot法檢測(cè)pcDNA3.1-hBMP2在兔BMSCs中蛋白的表達(dá)情況。
方法：(1)貼壁法培養(yǎng)擴(kuò)增所需BMSCs并從形態(tài)學(xué)、流式細(xì)胞儀測(cè)量表面標(biāo)記物。(2)
2、將已成功構(gòu)建的pcDNA3.1-hBMP2重組質(zhì)粒進(jìn)行體外靶細(xì)胞轉(zhuǎn)染并使用G418篩選穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞。(3)通過(guò)免疫組化、WesternBlot法檢測(cè)其在BMSCs中的蛋白表達(dá)。
結(jié)果：(1)經(jīng)培養(yǎng)，擴(kuò)增兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，P2、P3可作為hBMP2轉(zhuǎn)染的靶細(xì)胞。(2)用陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-hBMP2的MSCs經(jīng)G418篩選后，經(jīng)免疫組化、WesternBlot法檢測(cè)，轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-hBMP2后的兔骨髓
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