家蠶無鱗片翅突變體scaleless產(chǎn)生機理的研究.pdf

1、中國農(nóng)業(yè)科學院博士學位論文家蠶無鱗片翅突變體scaleless產(chǎn)生機理的研究姓名：周慶祥申請學位級別：博士專業(yè)：特種經(jīng)濟動物飼養(yǎng)指導教師：張志芳20070601個原神經(jīng)基因中BInASHl是最早分化形成的一個；BmA跚2利BmASH3同源性最高，推測相對于BmASHl形成較晚。用RTPCR和實時熒光定量PCR檢測了家蠶ASH基因在幼蟲期不同組織器官及胚胎發(fā)育過程中的表達情況，發(fā)現(xiàn)BmASHl和BInASH2表達范圍最』“，胚胎發(fā)育過程中

2、也有較高的表達量；而BmASH3表達特異性相對較高，因此推斷其形成較BmASH2為晚，即Bm_ASH3是四個家蠶ASH基因中最晚形成的一個。ase基因主要在神經(jīng)前體細胞中表達，岡此Bmase表達范圍較窄，組織中總體表達量較低。但同源比較和功能分析都不能將家蠶的三個原神經(jīng)基因和果蠅的一一對應(yīng)，囚此其命名依然按照發(fā)現(xiàn)的先后順序進行。通過半定量RTPCR發(fā)現(xiàn)家蠶的吐絲期利蛹期，BmMSHl和Bm以SH3基因在scaleless和、帆1家蠶中的

3、表達時相幾乎一致：BmASH2只在0d～2d的wT蛹翅中表達，而scaleless中沒有檢測到表達信號。原位雜交結(jié)果也證明BInASH2在scaleless蛹翅中不能正常表達。將wT及scaleless的BmASH2基因起始密碼子上游的啟動子序列克隆并測序，發(fā)現(xiàn)scaleless的ATG上游1027bp處有一段連續(xù)26bp的缺失突變。利用家蠶細胞瞬時表達系統(tǒng)分析了BmASH2基閌啟動子活性，發(fā)現(xiàn)scaleless比wT低得多，只與截去了

4、其缺失的26bp的979bpwT啟動子片段的活性相當。EMSA結(jié)果顯示scaleless缺失的26bp序列可以特異性結(jié)合某種核蛋白。遺傳學實驗則證明26bp序列缺失與無鱗片翅突變表型緊密連鎖。這些都說明scaleless的BmASH2基因因啟動子突變而使其不能正常轉(zhuǎn)錄和表達。利用瞬時表達系統(tǒng)使BInASH2基岡在scaleless早期蛹翅中表達，可以使翅面鱗片明顯增多，進一步說明BmASH2是家蠶翅面鱗片產(chǎn)生的芙鍵因子。從而初步闡明了家