生孢噬纖維菌、枯草芽孢桿菌、蘇云金芽孢桿菌三元融合子構(gòu)建及RAPD分析.pdf

1、本研究將能殺滅部分寄生蟲<'[1]>的蘇云金芽孢桿菌(Baoillus thudngie)、能凈化水質(zhì)、增強(qiáng)水產(chǎn)動物免疫力、促進(jìn)魚類生長<'[2-3]>的枯草芽孢桿菌(Bacillussubtills)和分解纖維素<'[4]>的生孢噬纖維菌(Sporocytophaga myxoooocoides)，進(jìn)行原生質(zhì)體融合，希望得到具有三親本優(yōu)良特性于一體的益生菌。通過篩選最終得到一株具有產(chǎn)生芽孢、水解淀粉、降解纖維素，產(chǎn)生植酸酶的多功能融合

2、子。 主要結(jié)果如下： 1.從土壤中分離純化蘇云金芽孢桿菌，并對物理生化特性進(jìn)行鑒定。結(jié)果獲得了一株產(chǎn)芽孢能力較強(qiáng)的蘇云金芽孢桿菌菌株BS-12。 2.分別對枯草芽孢桿菌和生孢噬纖維菌的二元融合子BP-1 和蘇云金芽孢桿菌BS-12 進(jìn)行生長曲線測定，結(jié)果顯示BS-12和BP-1對數(shù)生長中后期分別為6.0小時、7.0小時。 3.利用單因素試驗探討影響蘇云金芽孢桿菌BS-12和二元融合子BP-1原生質(zhì)體的形成

3、率和再生率的因素，結(jié)果顯示葡萄糖、甘氨酸和青霉素能影響原生質(zhì)體的形成和再生；BS-12、BP-1最佳溶菌酶濃度分別為6.0 mg/mL，5.0 mg/mL；最佳酶解時間分別為60分鐘，60分鐘。在最佳優(yōu)化體系下，BS-12菌株的原生質(zhì)體形成率和再生率分別82.7％，32.4％；二元融合子BP-1菌株為84.6％，34.6％。 4.用熱滅活的方法對蘇云金桿菌BS-12原生質(zhì)體進(jìn)行滅活處理，用紫外線對二元融合菌株BP-1進(jìn)行滅活處理

4、，結(jié)果顯示：BS-12原生質(zhì)體在60℃下滅活時間25分鐘，原生質(zhì)體的死亡率為100％；BP-1原生質(zhì)體用紫外滅活5 min，死亡率達(dá)100％。 5.在PEG6000和Ca<'2+>存在下，立即將BS-12和BP-1的原生質(zhì)體在37℃水浴箱中融合60 min，再進(jìn)行融合子篩選。在再生培養(yǎng)基上獲得68株三元融合子，連續(xù)傳代10代，獲得一株較穩(wěn)定的三元融合子FM-20-1。 6.比較親本及融合子菌落表型，顯微形態(tài)，生化特性，酶