紫蘇調(diào)節(jié)胃腸動力障礙大鼠腸運動功能的機理研究.pdf

1、目的： 胃腸運動功能是消化系統(tǒng)最主要的生理功能之一。正常的胃腸運動不僅傳送食糜，而且推動腸道內(nèi)細菌及其產(chǎn)物的排出，對胃腸道具有非特異免疫防御作用。已知，創(chuàng)傷、手術(shù)、放療、化療、嚴重感染等應激狀態(tài)下，患者經(jīng)常會出現(xiàn)腹脹、腹痛、惡心、嘔吐等一系列胃腸動力障礙表現(xiàn)，早期使用藥物恢復胃腸道功能對疾病的恢復和預防并發(fā)癥是至關(guān)重要的。目前，研究發(fā)現(xiàn)造成胃腸動力障礙的因素是多方面的，促進胃腸動力的西藥效果不佳，中藥治療取得了較好的臨床療效，具

2、有廣闊的應用前景。 芳香類中藥富含揮發(fā)油，能疏通氣機，宣化濕濁，消脹除痞，醒脾開胃。藥理、藥效學研究證明，本類藥物的揮發(fā)油與水溶液兩種組分均能不同程度刺激嗅覺、味覺及胃黏膜，增加胃粘膜血流、提高血清胃泌素水平和增強胃粘膜組織抗自由基損傷，保護應激狀態(tài)下的腸粘膜屏障功能，并興奮腸管蠕動，使胃腸推進運動加快。提示芳香類中藥具有促進胃腸運動的功能。 紫蘇為芳香運脾法的常用藥物，有芳香醒脾，和中開胃的功效。紫蘇莖葉含揮發(fā)油0.3

3、%-0.7%，主要成分為紫蘇醛、檸檬烯、紫蘇酮等。紫蘇對于芳香運脾，疏通中州，恢復脾胃受納運化的臨床應用效果顯著，但缺乏科學的實驗研究依據(jù)。為進一步探討芳香醒脾中藥調(diào)整胃腸運動的作用，揭示芳香藥物“運脾”作用機理，我們選用紫蘇為代表，采用肢體缺血-再灌注模擬應激導致的結(jié)腸動力障礙模型，擬通過結(jié)腸動力障礙觀察紫蘇梗水提液和紫蘇葉油對離體結(jié)腸平滑肌條收縮振幅、單個結(jié)腸平滑肌細胞長度、細胞內(nèi)鈣離子濃度、細胞膜電位、Ca2+-ATPase活性以

4、及結(jié)腸平滑肌細胞膜流動性等的影響，探討其促進結(jié)腸收縮運動的作用機制。 方法： 1. 建立肢體缺血-再灌引發(fā)的胃腸動力障礙模型，設(shè)立不同濃度中藥觀察組。 2. 制備大鼠離體結(jié)腸平滑肌環(huán)行肌條和離體單個結(jié)腸平滑肌細胞，通過觀察大鼠結(jié)腸平滑肌條收縮波平均振幅、結(jié)腸平滑肌細胞平均長度的變化，探討紫蘇結(jié)腸收縮運動的作用和機制。 3. 通過采用激光掃描共聚焦顯微鏡技術(shù)，測定結(jié)腸平滑肌細胞內(nèi)鈣離子濃度和細胞膜電位，定磷

5、法測定胞內(nèi)Ca2+-ATPase活性，探討紫蘇對細胞內(nèi)鈣離子濃度的影響，以及鈣動員的作用途徑，揭示紫蘇促進結(jié)腸收縮運動的作用機理。 4. 測定結(jié)腸平滑肌細胞膜流動性，觀察紫蘇對細胞膜的保護作用。 結(jié)果: 1. 肢體缺血-再灌注模型成功地模擬了應激狀態(tài)下的結(jié)腸動力障礙。再灌注12h后，大鼠結(jié)腸收縮波平均振幅、張力明顯下降（P<0.05，P<0.001）；并且大鼠結(jié)腸平滑肌細胞舒張，平均長度明顯增加（P<0.05），

6、呈現(xiàn)結(jié)腸動力障礙。模型大鼠出現(xiàn)結(jié)腸平滑肌細胞內(nèi)[Ca2+]i顯著下降，胞內(nèi)Ca2+-ATPase活性增加，細胞膜流動性降低。 2. 紫蘇梗水提液和紫蘇葉油均能升高模型大鼠結(jié)腸平滑肌環(huán)行肌條的收縮波平均振幅，促進結(jié)腸平滑肌的收縮。鈣通道阻斷劑鹽酸維拉帕米能夠抑制紫蘇兩種成分對結(jié)腸環(huán)行肌條收縮的增強效應，鹽酸普萘洛爾僅抑制紫蘇梗水提液的肌條收縮效應。膽堿能M受體阻斷劑阿托品對紫蘇兩種成分的結(jié)腸環(huán)行肌條收縮增強效應無明顯影響。

7、 3. 紫蘇梗水提液和紫蘇葉油均能減少模型大鼠結(jié)腸平滑肌細胞平均長度，增加平滑肌細胞的收縮率。鈣鰲合劑EGTA和鈣通道阻斷劑鹽酸維拉帕米對紫蘇兩種成分促進結(jié)腸平滑肌細胞收縮作用均由明顯的抑制作用。 4. 紫蘇梗水提液和紫蘇葉油均可增加模型大鼠結(jié)腸平滑肌細胞內(nèi)[Ca2+]i。IP3受體拮抗劑Heparin和ryanodine受體拮抗劑Ruthenium Red均可抑制紫蘇梗水提液增加胞內(nèi)[Ca2+]i的作用。兩種受體拮抗劑均不能抑

8、制紫蘇葉油升高胞內(nèi)[Ca2+]i的作用。 5. 紫蘇梗水提液和紫蘇葉油均能降低模型大鼠結(jié)腸平滑肌細胞膜電位，減少胞內(nèi)Ca2+-ATPase活性（P<0.05，P=0.001）。 6紫蘇梗水提液和紫蘇葉油均可增加模型大鼠結(jié)腸平滑肌細胞膜流動性（P<0.001）。 結(jié)論： 肢體缺血-再灌注模型成功模擬了應激狀態(tài)下的結(jié)腸動力障礙。紫蘇梗水提液和紫蘇葉油均可通過增加結(jié)腸平滑肌條收縮振幅和平滑肌細胞收縮率，升高胞內(nèi)

9、[Ca2+]i，達到促進結(jié)腸收縮運動的作用。紫蘇兩種成分均可通過增強平滑肌細胞膜的去極化，促進電壓依賴型鈣通道的開放，抑制Ca2+-ATPase活性，從而升高細胞內(nèi)[Ca2+]i，增強結(jié)腸運動功能。紫蘇梗水提液促進結(jié)腸運動的機理還包括參與或調(diào)整腎上腺素能β受體途徑，通過IICR和CICR兩種胞內(nèi)鈣庫釋放鈣途徑，促進細胞內(nèi)[Ca2+]i的增加，以及參與第二信使IP3介導的肌醇脂質(zhì)信號系統(tǒng)對平滑肌收縮作用的調(diào)節(jié)。紫蘇兩種成分均能維持平滑肌細