ASGM1介導PTX預處理小鼠發(fā)生過敏樣休克的作用及機制.pdf

1、背景：
　　過敏性休克的主要發(fā)病機制為:變應原與肥大細胞表面特異性IgE結合,介導IgE受體FcεRI交聯,激活肥大細胞使之脫顆粒并釋放組胺等過敏性介質,導致過敏反應發(fā)生。此外,變應原也可與特異性IgG1抗體結合,介導FcγRIII交聯,激活嗜堿粒細胞而引發(fā)過敏性休克,PAF是參與此機制的主要效應分子。但是,上述機制并不能用于解釋臨床患者和實驗動物所見的全部過敏反應現象。作者前期實驗發(fā)現,給EAE小鼠或經PTX預處理的小鼠注射抗A

2、SGM1抗體,可導致體溫降低、活動能力下降甚至死亡等過敏樣休克癥狀。
　　目的：
　　進一步證實抗ASGM1抗體可導致PTX預處理的小鼠發(fā)生過敏樣休克,并探討其作用機制。
　　方法：
　　1.動物模型制備:在第0天和第2天腹腔注射PTX,第7天通過腹腔或尾靜脈分別注射抗ASGM1抗體、抗PK136抗體、PAF、PTX和重組鞭毛蛋白。
　　2.體內封閉:使用不同抗體和拮抗劑處理,如抗MAR-1抗體清除嗜堿粒細

3、胞;抗PK136抗體用于清除NK細胞和NKT細胞;氯化釓(GdCl3)用于清除單核/巨噬細胞;triprolidine抑制組胺作用;CV-3988抑制PAF作用。
　　3.檢測指標:
　　(1)流式細胞術檢測細胞表面ASGM1表達,及PTX處理組嗜堿粒細胞數量變化和功能改變;ELISA檢測血清IgE水平。
　　(2)體外培養(yǎng)骨髓來源嗜堿粒細胞,觀察抗ASGM1抗體刺激后胞漿鈣離子濃度和ERK磷酸化反應,以及LysoPA

4、FAT/LPCAT2mRNA水平改變。
　　(3)Evansblue檢測血管通透性,鬼筆環(huán)肽檢測F-actin(反映PAF和PTX對內皮細胞的作用)。
　　(4)Real-time PCR、組織免疫熒光和WB檢測PTX處理對組織和內皮細胞IL-33合成和釋放的影響。
　　結果:
　　1.抗ASGM1抗體和細菌鞭毛蛋白均可通過ASGM1介導PTX預處理小鼠發(fā)生過敏樣休克。
　　2.ASGM1介導的過敏樣休克中

5、,嗜堿粒細胞是主要效應細胞,PAF是主要效應分子。
　　3.抗ASGM1可直接導致嗜堿粒細胞胞漿鈣離子濃度升高、ERK通路活化,活化的嗜堿粒細胞可合成、釋放PAF。
　　4.PTX處理可直接導致血管通透性升高,并升高內皮細胞對PAF敏感性,小鼠易發(fā)過敏性休克。
　　5.PTX處理可致嗜堿粒細胞升高,提高IgE水平,增強嗜堿粒細胞功能。
　　6.PTX處理可促進組織及內皮細胞釋放IL-33。
　　結論: