前列腺癌融合基因TMPRSS2-ERG在順鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡中的作用.pdf

1、前列腺癌(prostatecancer,PCa)為男性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，前列腺癌中可見(jiàn)TMPRSS2與ETS家族多個(gè)成員之間發(fā)生基因融合，而TMPRSS2-ERG為最常出現(xiàn)的基因融合類型。已有研究表明，TMPRSS2-ERG基因融合在PCa中與腫瘤細(xì)胞的侵襲與增殖相關(guān)，但對(duì)細(xì)胞死亡的作用鮮有研究。
　　目的:
　　分析TMPRSS2-ERG融合基因?qū)樸K(cisplatin)引起的細(xì)胞死亡的影響，并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行更深入的研

2、究，獲得TMPRSS2-ERG融合基因參與細(xì)胞死亡調(diào)控的證據(jù)。
　　方法:
　　1.用TMPRSS2-ERG陰性的DU145細(xì)胞構(gòu)建TMPRSS2-ERG融合基因編碼序列
　　△ERG瞬時(shí)轉(zhuǎn)染株，cisplatin染毒，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡。
　　2.siRNA干擾TMPRSS2-ERG陽(yáng)性的的VcaP細(xì)胞，介導(dǎo)TMPRSS2-ERG融合基因表達(dá)下調(diào)，cisplatin染毒，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡。
　　3.

3、TMPRSS2-ERG融合基因?qū)isplatin引起的細(xì)胞死亡的作用機(jī)制研究:
　　Western-blot檢測(cè)染毒處理細(xì)胞γH2AX蛋白的表達(dá)差異，明確融合基因?qū)?xì)胞DNA損傷的影響;q-PCR檢測(cè)293-ERG穩(wěn)定轉(zhuǎn)染株中凋亡相關(guān)基因的表達(dá);染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)驗(yàn)證q-PCR結(jié)果。
　　結(jié)果:
　　1.DU145細(xì)胞過(guò)表達(dá)TMPRSS2-ERG對(duì)順鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡有抑制作用，轉(zhuǎn)染組與對(duì)照組細(xì)胞死亡率各為1

4、4.67±2.69％和30.59±3.28％。
　　2.siRNA干擾VcaP細(xì)胞使TMPRSS2-ERG表達(dá)下調(diào)后，順鉑處理，干擾組細(xì)胞凋亡率顯著升高，由原來(lái)的13.59±2.82％升至21.35±3.33％。
　　3.Western-blot結(jié)果顯示，293-ERG穩(wěn)定轉(zhuǎn)染株細(xì)胞染毒后DNA損傷指標(biāo)γH2AX蛋白表達(dá)量比對(duì)照組相差約1.8倍，提示融合基因可抑制DNA損傷。
　　4.Q-PCR結(jié)果表明，過(guò)表達(dá)△ERG