雙醋瑞因納米材料對(duì)骨性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)軟骨退變過程中iNOS表達(dá)的影響.pdf

1、目的:探討雙醋瑞因能否促進(jìn)軟骨細(xì)胞的增值分化、降低軟骨細(xì)胞iNOS基因表達(dá)水平，減輕關(guān)節(jié)軟骨的退變過程，尋求骨關(guān)節(jié)治療的有效途徑。
　　方法:一，分組造模Wistar大鼠66只，隨機(jī)分為6組，為對(duì)照陰性組、對(duì)照陽(yáng)性組、治療大劑量組、治療中劑量組、治療小劑量組、對(duì)照空白組，前5組給予切斷前交叉韌帶建立骨關(guān)節(jié)炎模型（簡(jiǎn)稱ACLT模型），對(duì)照空白組給予雙側(cè)膝關(guān)節(jié)做關(guān)節(jié)囊切開。二，分組給藥:Wistar大鼠66只隨機(jī)分為6組:1，對(duì)照陰性

2、組12只，對(duì)照陰性組給于生理鹽水灌胃;2，對(duì)照陽(yáng)性組12只，對(duì)照陽(yáng)性組給于中藥灌胃;3，治療大劑量組12只，治療大劑量組給于雙醋瑞因藥物灌胃0.02mg/g（選擇2倍劑量）;4，治療中劑量組12只，治療中劑量組給予雙醋瑞因藥物灌胃0.02mg/g（選擇1倍劑量）;5，治療小劑量組12只，治療小劑量組給予雙醋瑞因藥物0.01mg/g（選擇1/2倍劑量）;6.對(duì)照空白組6只，對(duì)照空白組不予灌胃。三，取材及標(biāo)本處理:取膝關(guān)節(jié)上下各2CM區(qū)域的

3、組織，去除皮膚，置于4％多聚甲醛液中，4℃下固定24小時(shí)，固定標(biāo)本后剔除周圍軟組織及韌帶，PBS充分浸洗，流水沖洗2H，15％的EDTA液脫鈣2周，流水沖洗24小時(shí)，只留股骨部分，將其沿矢狀面分為2等份，修正組織塊并石蠟包埋后一部分行HE染色，另一部分行免疫組化檢測(cè)，兩部分組織均做矢狀面切片，間隔5um,（對(duì)照空白組的兩個(gè)膝關(guān)節(jié)都要取材，其余各組手術(shù)膝關(guān)節(jié)取材）四，檢測(cè)①肉眼觀察股骨髁關(guān)節(jié)面得病理大體改變②組織形態(tài)學(xué)（HE染色）:取股骨

4、內(nèi)測(cè)軟骨帶軟骨下骨質(zhì)軟骨標(biāo)本做HE染色，觀察關(guān)節(jié)軟骨組織形態(tài)學(xué)變化。③取股骨內(nèi)測(cè)軟骨帶軟骨下骨質(zhì)軟骨標(biāo)本做免疫組織化學(xué):應(yīng)用兔抗大鼠NOS多克隆抗體和羊抗兔IgG二抗后，DAB顯色，顯微鏡下觀察陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)目。
　　結(jié)果:iNOS主要表達(dá)在軟骨細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)里面，治療組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目明顯低于對(duì)照組(p＜0.05)，治療組中的大劑量組的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目明顯低于中、小劑量和中藥組(p＜0.05)，應(yīng)用雙醋瑞因納米材料的治療組與對(duì)照組比較，股骨