透骨消痛膠囊干預骨性關節(jié)炎軟骨退變的機制研究.pdf

1、目的：
　　通過觀察透骨消痛膠囊對大鼠骨性關節(jié)炎關節(jié)軟骨病理改變以及對退變軟骨細胞自噬中的LC3Ⅰ/Ⅱ，ULK1，Beclin1表達的影響，探討透骨消痛膠囊對骨性關節(jié)炎軟骨退變的作用機制。
　　方法：
　　44只SD大鼠，采用抽簽法將SD大鼠隨機分為2組，造模組33只，正常組11只。造模組采用木瓜蛋白酶注射制備大鼠骨性關節(jié)炎模型，前期課題組已經鑒定模型制備成功。按抽簽法將造模成功的造模組大鼠隨機分為3組，每組11只，分

2、別為:透骨消痛膠囊組、葡萄糖胺組、模型組。正常組和模型組生理鹽水灌胃。透骨消痛膠囊組用透骨消痛膠囊水溶液灌胃。葡萄糖胺組用葡萄糖胺水溶液灌胃，每天給藥1次，連續(xù)給藥12周。灌胃干預12周后，將所有動物處死，拍攝左膝關節(jié)X線片并取軟骨組織待測，同時用光鏡、掃描電鏡、透射電鏡、進行組織形態(tài)學觀察，Westernblot檢測軟骨LC3Ⅰ/Ⅱ、ULK1、Beclin1的表達。
　　結果：
　　1.X片觀察結果模型組:膝關節(jié)內側間隙明

3、顯變窄，關節(jié)面硬化，股骨內髁、脛骨平臺內側緣及關節(jié)邊緣有明顯骨贅形成。透骨消痛膠囊組:膝關節(jié)內側間隙變窄，但較模型組改變輕，關節(jié)面輕微硬化，關節(jié)邊緣有輕微骨贅形成，軟骨下骨骨密度稍增高。與模型組相比，透骨消痛膠囊組、葡萄糖胺組大鼠膝關節(jié)總體形態(tài)變化有明顯差異。
　　2.軟骨掃描電鏡結果正常組:關節(jié)軟骨表面光滑，呈典型的壟溝樣結構，無軟骨細胞和膠原裸露。模型組:軟骨表面膠原纖維裸露，形成流水沖蝕樣改變，膠原纖維網增粗、斷裂、剝落，圓

4、形突起增多，軟骨面壟形結構完全消失，表面粗糙，軟骨細胞隱窩完全暴露，完整的網架結構完全消失。透骨消痛膠囊組:表層膠原纖維裸露，排列較不規(guī)則，有的軟骨細胞的隱窩暴露在殘余的膠原纖維之間。與模型組相比，葡萄糖胺組、透骨消痛膠囊組軟骨表面的損傷程度有明顯差異，正常組較模型組脛骨平臺保持良好的完整性并具有光滑的輪廓，有顯著差異。
　　3.蕃紅O-固綠染色觀察結果正常組:關節(jié)軟骨表面光滑，四層結構清晰，軟骨細胞排列整齊，未見軟骨細胞簇聚，由

5、淺入深可分為表淺層、移行層（中間層）、深層（放射層）、鈣化層，潮線完整，染色質分布均勻，細胞核清晰，染色均勻。模型組:關節(jié)軟骨表面粗糙，部分軟骨細胞核萎縮、壞死，鈣化層軟骨細胞聚集，排列不規(guī)則，四層結構不易區(qū)分，潮線多不完整或完全消失，甚至軟骨下骨暴露及囊變形成。透骨消痛膠囊組:關節(jié)軟骨表面不甚光滑，四層結構仍然可以區(qū)分，軟骨層輕微變薄，中間層細胞和深層細胞輕度增生，可染蛋白多糖染色變淺，軟骨細胞排列規(guī)則，同時可見增生軟骨細胞呈巢狀，潮

6、線完整。與正常組相比，模型組脛骨平臺軟骨具有明顯的組織學變化。與模型組相比，透骨消痛膠囊組、葡萄糖胺組脛骨平臺軟骨組織變學化，有明顯的差異。透骨消痛膠囊組、葡萄糖胺組和模型組的Mankin軟骨評分均顯著高于正常組(P＜0.01)，透骨消痛膠囊組和葡萄糖胺組的Mankin軟骨評分均顯著低于模型組(P＜0.01)。
　　4.透射電鏡觀察:模型組與正常組對比，軟骨細胞及骨細胞超微結構對比差異明顯。與模型組相比，透骨消痛膠囊組、葡萄糖胺組

7、軟骨和軟骨下骨退化并不十分嚴重。
　　5.Westernblot檢測軟骨LC3Ⅰ/Ⅱ、ULK1、Beclin1的表達:模型組LC3Ⅰ/Ⅱ，ULK1和Beclin1蛋白的表達明顯低于正常組（P＜0.01）。透骨消痛膠囊組，葡萄糖胺組LC3Ⅰ/Ⅱ，ULK1和Beclin1蛋白的表達明顯高于模型組（P＜0.01）。
　　結論：
　　1.透骨消痛膠囊可通過改善軟骨下骨膠原纖維和鈣磷結晶的排列，抑制潮線復制，從而延緩關節(jié)軟骨的退