長(zhǎng)期游泳運(yùn)動(dòng)后大鼠額葉運(yùn)動(dòng)腦區(qū)c-fos的表達(dá).pdf

1、目的：觀察長(zhǎng)期游泳運(yùn)動(dòng)后大鼠額葉的初級(jí)、次級(jí)運(yùn)動(dòng)皮質(zhì)及伏核等腦區(qū)c-fos的表達(dá)，探討長(zhǎng)期游泳運(yùn)動(dòng)過程中c-fos表達(dá)及作用的可能機(jī)制。 材料與方法：健康純種雄性SD(Sprague Dawley)大鼠110只，隨機(jī)分為對(duì)照組(n=10)、間歇游泳運(yùn)動(dòng)組(n=50)、持續(xù)游泳運(yùn)動(dòng)組(n=50)，游泳運(yùn)動(dòng)組經(jīng)過3天適應(yīng)性訓(xùn)練后，分別以間歇游泳運(yùn)動(dòng)方式、持續(xù)游泳運(yùn)動(dòng)方式進(jìn)行6周游泳運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練；對(duì)照組常規(guī)飼養(yǎng)，不加任何干預(yù)。在第6周運(yùn)動(dòng)

2、結(jié)束后即刻、30min、60min、120min、240min 5個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每一時(shí)間點(diǎn)從兩運(yùn)動(dòng)組各隨機(jī)選取10只大鼠，腹腔麻醉，其中5只冰上取新鮮腦組織后入液氮保存，另外5只經(jīng)心依次灌注生理鹽水、多聚甲醛、PBS蔗糖后取腦，經(jīng)過后固定、脫水后4℃保存。對(duì)照組與運(yùn)動(dòng)后即刻組同時(shí)麻醉取材(新鮮取材、固定后取材各5只)。 取新鮮腦額葉皮質(zhì)，提取總RNA、逆轉(zhuǎn)錄為cDNA、再與特定引物反應(yīng)擴(kuò)增c-fos、β-aetin(內(nèi)參)片段，擴(kuò)增

3、產(chǎn)物經(jīng)1.5％瓊脂糖凝膠電泳、凝膠成像系統(tǒng)掃描、photoshop軟件分析圖像得到c-fos mRNA相對(duì)表達(dá)量。 取灌注后腦標(biāo)本視交叉以前部分進(jìn)行冰凍切片，片厚為30μm，隔三取一，切片經(jīng)PBS漂洗后，3％H2O2孵育，5％小牛血清封閉，加入兔抗鼠c-fos多克隆抗體4℃過夜，漂洗后再與生物素化羊抗兔IgG、SABC反應(yīng)，DAB顯色，0.02％明膠裱片，自然風(fēng)干后脫水、透明、封片。鏡下觀察c-fos表達(dá)情況，并選取運(yùn)動(dòng)皮質(zhì)、伏

4、核，顯微鏡下觀察并拍照，圖像分析軟件進(jìn)行c-fos陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)。 RT-PCR結(jié)果和免疫組化陽性細(xì)胞數(shù)均應(yīng)用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果用x±s，以P<0.05為有顯著性差異。 結(jié)果：RT-PCR結(jié)果：6周游泳運(yùn)動(dòng)后，運(yùn)動(dòng)組c-fos mRNA表達(dá)增加，且顯著高于對(duì)照組，間歇運(yùn)動(dòng)組和持續(xù)運(yùn)動(dòng)組分別在運(yùn)動(dòng)后60min和120min達(dá)峰值，隨后逐漸下降，但兩運(yùn)動(dòng)組之間表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 免疫組織化學(xué)結(jié)果：6周游泳

5、運(yùn)動(dòng)后，大鼠額葉c-fos陽性細(xì)胞數(shù)增多。在初級(jí)運(yùn)動(dòng)皮質(zhì)(M1)、次級(jí)運(yùn)動(dòng)皮質(zhì)(M2)、伏核(A)呈均勻表達(dá)。兩種游泳運(yùn)動(dòng)后，M1區(qū)c-fos陽性細(xì)胞最大值都出現(xiàn)在30min；間歇組M2區(qū)c-fos陽性細(xì)胞最大值在60min，而持續(xù)組M2區(qū)無顯著變化；伏核的間歇組最大值出現(xiàn)在60min，持續(xù)組則呈增高趨勢(shì)，240min仍未見下降。 結(jié)論：①長(zhǎng)期游泳運(yùn)動(dòng)后，同種運(yùn)動(dòng)的初級(jí)運(yùn)動(dòng)皮質(zhì)和次級(jí)運(yùn)動(dòng)皮質(zhì)c-fos的表達(dá)均增多，但各腦區(qū)在表達(dá)