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文檔簡介
1、目的:探討大鼠腦缺氧缺血損傷(HIBD)后c-fos蛋白的表達(dá),MDA含量和SOD活力的改變以及姜黃素對上述指標(biāo)的影響。
方法:將雄性清潔級sprague-Dawley(SD)大鼠72只,體重180-220g,隨機(jī)等分為假手術(shù)對照組(SH組)、腦缺氧缺血組(HI組)、姜黃素組(CU組)、溶劑對照組(SC組),每組內(nèi)據(jù)處死時間點的不同又分2h、4h和6h三個亞組,每組6只動物。SH組僅游離左側(cè)頸總動脈但不結(jié)扎,余者制備HIB
2、D動物模型,結(jié)扎左側(cè)頸總動脈后,置于常壓低氧艙中2h。艙內(nèi)充入N2使O2濃度降低,隨后進(jìn)行調(diào)節(jié)使其維持在8%O2、92%N2的環(huán)境中,環(huán)境溫度恒定為22~25℃。CU組在術(shù)前1h腹腔注射給予姜黃素(curcumin)40mg/kg,SC組同時間點腹腔注射等量二甲基亞砜。
將大鼠在各時間點急性斷頭處死,分別制備大鼠的大腦石蠟標(biāo)本、電鏡標(biāo)本和活組織冰凍標(biāo)本。光鏡觀察結(jié)扎側(cè)HE染色的皮質(zhì)及海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。電鏡觀察腦組織
3、形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)變化。免疫組化檢測皮質(zhì)及海馬區(qū)即早基因的相關(guān)蛋白c-fos蛋白的表達(dá)。將冰凍腦組織制備勻漿檢測丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量。
結(jié)果:
1.光鏡觀察:HE染色的SH組腦組織無水腫、壞死,皮質(zhì)與海馬各區(qū)錐體細(xì)胞排列整齊,邊界清,形態(tài)正常,神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量未見減少。HI組大腦皮質(zhì)與海馬區(qū)水腫,神經(jīng)細(xì)胞數(shù)減少,細(xì)胞核固縮,細(xì)胞周圍間隙增寬,與SH組比較顯著差異。CU組與HI組相比腦組織損傷明顯
4、減輕,大部分細(xì)胞邊界清,核形狀規(guī)則,核邊界清,核固縮細(xì)胞減少。SC組與HI組基本相同。
2.透射電鏡觀察:SH組神經(jīng)元細(xì)胞核大而圓,核仁清晰,雙層結(jié)構(gòu)的核膜包在核外,膠質(zhì)細(xì)胞胞核正常,無水腫,超微結(jié)構(gòu)正常。HI組皮質(zhì)神經(jīng)元粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張、線粒體輕微腫脹,同時見有神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞的核膜內(nèi)陷皺縮,核體積縮小的核固縮表現(xiàn)。CU組神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞和毛細(xì)血管周圍水腫程度減輕,核固縮的細(xì)胞數(shù)量明顯減少。SC組腦損傷程度同HI組。
5、> 3.MDA含量:HI、CU、SC組的4h、6h組與同組2h組相比,MDA含量增加(P<0.05)。CU組MDA含量與對應(yīng)時間點HI組相比明顯減低(P<0.05)。SC組MDA含量與HI組相比無統(tǒng)計學(xué)差異。SH組各時間段相比無顯著性意義(P>0.05)。
4.SOD活性:除SH組外,HI、CU、SC組的SOD活性在缺氧缺血后6h內(nèi)隨時間延長而降低(P<0.05)。與HI組和SC組相比,CU組同時間點SOD含量增加(
6、P<0.05)。SH組各時間段相比無顯著性意義(P>0.05)。
5.免疫組化:c-fos蛋白在SH組的皮質(zhì)與海馬區(qū)的各時間段表達(dá)量和OD值均低于其他各組水平(P<0.05).其余三組可見c-fos蛋白不同程度的表達(dá)。皮質(zhì)缺氧缺血2h后結(jié)扎側(cè)皮質(zhì)區(qū)的c-fos蛋白陽性表達(dá)率與OD值明顯高于SH組(P<0.05)。CU組2h的蛋白陽性率最高(P<0.01),以后表達(dá)減弱,但仍然高于其他各組水平。在海馬區(qū),各組各時間點的c-f
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