榮昌豬、長白豬免疫相關(guān)基因FKBP5的克隆、表達(dá)以及其表達(dá)蛋白質(zhì)活性分析.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)用RACE、qPCR、Western Blot、基因克隆、測序、表達(dá)蛋白等方法，克隆了榮昌豬、長白豬FKBP5基因cDNA全長、構(gòu)建了FKBP5組織表達(dá)譜、表達(dá)純化了FKBP5蛋白，得到了如下結(jié)果:
　　1、利用3'，5'末端快速擴(kuò)增法(Rapid Amplification of cDNA Ends techniques，RACE)從榮昌豬和長白豬胸腺組織中首次克隆出榮昌豬、長白豬FKBP5基因。榮昌豬FKBP5基因cDN

2、A全長為4119 bp，CDS區(qū)長為1374 bp，編碼458個氨基酸的多肽，在5'端和3'端分別含有212 bp和2533bp的非編碼區(qū);長白豬FKBP5基因cDNA全長為4164bp，CDS區(qū)長為1374bp，編碼458個氨基酸的多肽，在5'端和3'端分別含有255bp和2535bp的非編碼區(qū)。
　　2、運(yùn)用qPCR和Western Blot技術(shù)檢測了該基因在榮昌豬和長白豬不同組織中的mRNA和蛋白表達(dá)譜，并且分析了FKBP5

3、 mRNA在榮昌豬和長白豬各組織中的表達(dá)差異。研究結(jié)果表明，在所檢測的組織中，心、肝、脾、肺、腎、胃、腦、肌肉、性腺、胸腺中均有FKBP5基因表達(dá)，其中，在先天免疫相關(guān)組織胸腺中表達(dá)豐度最高，且顯著性高于其它組織，并且FKBP5基因在長自豬胸腺組織中的表達(dá)量顯著性高于榮昌豬胸腺組織表達(dá)量。
　　3、分別將榮昌豬、長白豬CDS區(qū)克隆進(jìn)原核表達(dá)載體pET-28a，構(gòu)建好的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化Rosetta蛋白表達(dá)菌，分離純化出具有活性的榮昌豬