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文檔簡介
1、目的:1研究成人骨髓間充質干細胞在體外培養(yǎng)條件下,傳代次數與細胞凋亡的關系.2研究體外培養(yǎng)的各代間充質干細胞及其成骨分化后的部分細胞表面抗原變化.3探討5-氮雜胞苷(5-Aza)誘導大鼠骨髓間充質干細胞(MSCs)分化為成肌細胞(骨骼肌)的可能性.第一部分體外培養(yǎng)對骨髓間充質干細胞凋亡的影響;方法:抽取志原者紅骨髓8ml,按照Wakitani的方法培養(yǎng)出骨髓間充質干細胞.在含10％胎牛血清的低糖DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng),通過傳代培養(yǎng)擴增MS
2、Cs.采用Annexin V/PI雙染色法,在流式細胞儀上檢測不同傳代數的成人骨髓間充質干細胞的凋亡情況.第二部分成人骨髓間充質干細胞部分表面抗原的測定;方法:將體外普通培養(yǎng)的骨髓間充質干細胞,每隔一代(1、3、5、7代)進行CD48、CD56、CD71和CD90抗體標記,然后在流式細胞儀上檢測其陽性表達率.另外,為促進成人MSCs體外成骨性分化,第1傳代培養(yǎng)時加入成骨性添加劑,培養(yǎng)第6、12、18、24、30天時,也分別用流式細胞儀分
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