豬血酶解物抗氧化活性的研究.pdf

1、本文以豬全血、豬血球、豬血漿為原料，以脂質(zhì)氧化抑制力(AL)、DPPH(二苯代苦昧酰自由基)清除能力(DRSA)、亞鐵離子螯合能力(FICP)為測定指標(biāo)，探討了豬全血、豬血球、豬血漿分別在木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、AS1398中性蛋白酶、Alcalase堿性蛋白酶、胰蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶復(fù)合、AS1398中性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶復(fù)合、Alcalase堿性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶復(fù)合作用下所得水解物的抗氧化性，分離了豬血漿胃蛋白酶水解液(PP

2、E)；研究了PPE在大豆粉、魚粉中的抗氧化效果。結(jié)果表明： 1．不同酶作用得到全血粉水解液、血球粉水解液、血漿粉水解液的AL不同，但大多數(shù)全血粉、血球粉、血漿粉的水解液與空白相比，具有極好抑制脂質(zhì)氧化的作用(p<0.01)。全血粉上述酶的水解物中，測定體系水解物濃度為10μg/mL時(shí)，全血粉ASl398t辛性蛋白酶水解物(AP)的AL最為顯著，其誘導(dǎo)期是空白的7.15倍；測定體系水解物濃度為100μg/mL時(shí)，AP和胰蛋白酶風(fēng)味

3、蛋白酶雙酶水解物(TFP)最為顯著，其誘導(dǎo)期是空白的8.09倍。血球粉水解液中，測定體系水解物濃度為10μg/mL時(shí)，胰蛋白酶風(fēng)味蛋白酶雙酶水解物(TFH)最為顯著，其誘導(dǎo)期是空白的6.9倍；水解物濃度為100μg/mL時(shí)，Alcalase風(fēng)味酶雙酶水解物(AFH)最為顯著，是空白的9.89倍，而木瓜蛋白酶水解物(PAH)存在促進(jìn)脂質(zhì)氧化的作用。血漿粉水解液中，水解物濃度為10μg/mL時(shí)，PPE最為顯著，其誘導(dǎo)期是空白的4.00倍；測

4、定體系水解物濃度為100μg/mL時(shí)，PPE、木瓜蛋白酶水解液(PPA)、AS1398N,味酶水解物(PASF)的最佳，其誘導(dǎo)期是空白的8.09倍，而胰蛋白酶水解物(PT)沒有AL。 2．不同酶作用得到全血粉水解液、血球粉水解液、血漿粉水解液的DRSA不同，部分水解液具有一定的DPPH清除能力。全血粉酶的水解物中，測定體系水解物濃度10μg/mL時(shí)，水解液的DRSA均小于5％，水解物濃度100μg/mL時(shí)，水解液的DRSA主要為

5、15～25％，而水解物濃度為500μg/mL時(shí)，除AS1398qp性蛋白酶水解物(ASP)的較弱，僅28.9％，其他水解液的DRSA均可超過50％，胃蛋白酶水解物(PEP)的最佳，可達(dá)75.5％。血球粉水解物中，測定體系水解物濃度10μg/mL時(shí)，其DRSA與全血粉的相似，水解物濃度100μg/mL時(shí)，水解液除胃蛋白酶水解液(PEH)外，其它的DRSA主要為30-50％，AS1398風(fēng)味酶雙酶水解物(ASFH)的最強(qiáng)，可達(dá)49.56％，

6、而水解物濃度500μg/mL時(shí)，水解液的DRSA主要為50-60％，AS1398中性蛋白酶水解物(ASH)的最強(qiáng)，為61.6％。血漿粉酶水解液中，測定體系水解物濃度10～100μg/mL時(shí)，水解液的DRSA與全血粉的基本相同，而在水解物濃度500μg/mL，其DRSA主要為45-50％，其中PPE最佳，為48.4％。 3．不同酶作用得到全血水解液、血球水解液、血漿水解液對金屬離子的螯合能力不同，部分水解物具有金屬離子螯合能力。測

7、定體系水解物濃度為100μg/mL，在100M FeCl<,2>體系時(shí)，只有ASFH、豬血漿AS1398蛋白酶水解物(PAS)的FICP大于50％，PPE為30％，但與10μM的EDTA的相差甚遠(yuǎn)。在50μM FeCl<,2>體系時(shí)，全血粉水解液中，ASP的最顯著，為EDTA的1.47倍；血球粉水解液中，ASFH的最強(qiáng)，約為EDTA的2.18倍；血漿粉水解物中，豬血漿胰蛋白酶風(fēng)味酶雙酶水解物(PTF)、PAS最強(qiáng)，約為10μM的EDTA

8、的2.6倍，PPE為10μM EDTA的1.5倍。從總體上說，水解物金屬離子的螯合能力較弱，且其螯合率與Fe<'2+>的濃度沒有線性關(guān)系。 4．分析不同酶水解物在不同濃度下的AL、DRSA和FICP的能力，PPE的抗氧化活性較好，而且該產(chǎn)品不含血紅素。 5．采用Resource 15RPC、Superdex peptide 10/300GL分離PPE，研究多肽的極性、相對分子質(zhì)量對抗氧化活性的影響，分別得到R1、。R2、

9、R3、R4(疏水性從弱到強(qiáng))，S1、S2、S3(相對分子質(zhì)量從大到小)。結(jié)果表明：具有抑制脂質(zhì)氧化力的主要為疏水性較弱、相對分子質(zhì)量為1000u-7000u的多肽：具有DPPH自由基清除能力的主要為疏水性較強(qiáng)多肽，在不同相對分子質(zhì)量均有分布，且相對分子質(zhì)量為7000u-12000u的DRSA強(qiáng)于相對分子質(zhì)量為<7000u的多肽；分離物的FICP都不及未分離的PPE。 6．PPE的抗氧化應(yīng)用實(shí)驗(yàn)。以酸價(jià)和過氧化值為指標(biāo)，在大豆粉、