白菜病害生防多功能工程菌株的構(gòu)建.pdf

1、為了選育對(duì)多種白菜病害具有拮抗作用的菌株用于生物防治，本試驗(yàn)以革蘭氏陽性菌芽孢桿菌KR.和革蘭氏陰性菌假單胞菌B13為親本進(jìn)行原生質(zhì)體融合，主要結(jié)果如下： 在以0.6 mol/L，蔗糖為穩(wěn)定劑，pH 8.0，溶菌酶8 mg/mL，37℃，酶解80 min的條件下，KR.原生質(zhì)體得率可達(dá)31.6％；在以.0.6 mol/L NaCI為穩(wěn)定劑，pH 7.0，溶菌酶6 mg/mL，37℃，酶解45 min，B13原生質(zhì)體可達(dá)95.2％

2、。 為了提高再生率，KR酶解20 min，采用夾層培養(yǎng)，再生培養(yǎng)基中以0.6 mol/L蔗糖做穩(wěn)定劑，Ca<'2+>0.03mol/L，Mg<'2+> 0.02 mol/L，琥珀酸鈉0.3 mol/L，L-色氨酸0.2 g/L，培養(yǎng)基在37℃下放置72 h原生質(zhì)體再生率可達(dá)42.7％；B13酶解15 min，采用夾層培養(yǎng)，培養(yǎng)基中以0.6 mol/L NaCl做穩(wěn)定劑，Ca<'2+>0.02 mol/L，Mg<'2+>0.01

3、mol/L，琥珀酸鈉0.3 mol/L，L-色氨酸0.1 g/L，培養(yǎng)基在37℃下放置48 h原生質(zhì)體再生率可達(dá)15.3％。 2.0單位/mL的硫酸妥布霉素和5×10<'-3>g/mL的氯霉素可分別抑制B13和KR，培養(yǎng)基中添加這兩種抗生素可選出融合子。本試驗(yàn)共得到182個(gè)融合子，連續(xù)傳10代后，得到一株能穩(wěn)定遺傳的融合子KB1。 KBl長2.99381μm，寬0.45195 μm，桿狀，周生鞭毛，有芽孢，革蘭氏染色陰性