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1、目的:制備出宮頸酸性磷酸酶蛋白(Cervical acid phosphatase,CAP)的單克隆抗體,并對(duì)其相關(guān)的生物學(xué)特性進(jìn)行鑒定;同時(shí)應(yīng)用Mark-Pap試劑盒檢測(cè)患者宮頸涂片中的CAP表達(dá),并與TCT(Thinprep cytologic test)制片診斷確診結(jié)果進(jìn)行比較。方法:將CAP蛋白免疫Balb/c雌性小鼠,常規(guī)聚乙二醇介導(dǎo)融合,以間接ELISA方法篩選陽(yáng)性克隆,有限稀釋法亞克隆篩選單克隆細(xì)胞株,并使用秋水仙素對(duì)其核
2、型進(jìn)行鑒定,使用ISO-2鼠源單克隆抗體亞型檢測(cè)試劑盒檢測(cè)其亞類,并檢測(cè)其效價(jià)、特異性等;用Mark-PAP試劑盒檢測(cè)CAP蛋白在350例行常規(guī)婦科體檢女性宮頸組織細(xì)胞中的表達(dá),細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)紅色沉淀即為CAP陽(yáng)性,并與TCT制片診斷確診結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果:篩選出能夠穩(wěn)定分泌抗CAP單抗的雜交瘤細(xì)胞株1B11和3C12,其單克隆抗體的亞型經(jīng)鑒定為IgG2b和IgG1,抗體的效價(jià)在106以上;宮頸酸性磷酸酶在宮頸癌患者組織細(xì)胞中呈陽(yáng)性表達(dá),而
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