水稻白葉枯病菌中與H2O2降解相關(guān)基因oxyR、ahpC、catB和katE的表達(dá)動態(tài)分析.pdf

1、為了找出一種快速檢測細(xì)菌內(nèi)源H2O2的方法，本研究以大腸桿菌(Escherichia coli，簡稱E.coli)野生型及H2O2突變體菌株為研究對象，比較分析辣根過氧化物酶—酚紅法、熒光法、硫酸鈦法檢測E.coli在同一生長時期內(nèi)源 H2O2的水平及其差異，結(jié)果表明熒光法的靈敏度比較高，操作也比較簡單方便，是一種快速檢測細(xì)菌內(nèi)源H2O2的理想方法。
　　為了闡明抗氧化基因(ahpC/F、katE/G、oxyRahpC/F、sod

2、A/B)在對細(xì)菌內(nèi)源H2O2調(diào)控中的協(xié)同作用，本研究以E.coli抗氧化基因突變株及其野生型菌株為研究對象，紫外分光光度法分析過氧化氫酶活性變化，熒光法檢測內(nèi)源H2O2濃度變化，組織化學(xué)法對細(xì)胞內(nèi)H2O2進(jìn)行定量和定位分析，光密度法分析菌株生長規(guī)律。結(jié)果表明：與野生型菌株相比，JI367、JI370和AS240生長過程中過氧化氫酶活性總體升高，整個生長周期中H2O2濃度降低，而LC74過氧化氫酶活性降低，整個生長周期中內(nèi)源H2O2濃度升

3、高；組織化學(xué)染色法表明各菌株內(nèi)源H2O2有顯著差異（P<0.05），LC74內(nèi)源 H2O2累積量最多；JI367、JI370和AS240生長遲緩，LC74對數(shù)期后期生長速度較野生型快。結(jié)果顯示：當(dāng)H2O2濃度累積到高于大約5.4μmol/L時促進(jìn)E.coli生長，不同的抗氧化基因之間受OxyR調(diào)控存在補償性表達(dá)作用，抗氧化酶AhpC/F在降解內(nèi)源H2O2方面起主要作用。
　　由水稻白葉枯病菌(Xanthomonas oryzaep

4、v.oryzae，簡稱Xoo)侵染水稻葉片發(fā)生親和互作導(dǎo)致水稻白葉枯病的發(fā)生是一種嚴(yán)重危害水稻減產(chǎn)的細(xì)菌病害。在Xoo基因組中存在多種抗氧化酶相關(guān)基因：如oxyRxoo、catBxoo、ahpCxoo和katExoo，為了闡明H2O2解毒相關(guān)基因oxyR、catB、ahpC和katE在細(xì)菌生長的不同時期以及在互作的不同時間段對H2O2降解途徑的作用機理，本研究通過構(gòu)建不同的表達(dá)載體，利用對lacZ活性檢測和qRT-PCR方法，檢測了ox

5、yR、catB和katE啟動子活性強弱以及oxyR、ahpC、catB和katE在細(xì)菌生長的不同時期以及在互作的不同時間段的表達(dá)情況，結(jié)果表明oxyR、catB和katE啟動子在PXO99A中都有活性并且oxyR的活性最高，catB和katE的活性差不多且它們的轉(zhuǎn)錄受到OxyR的調(diào)控；在細(xì)菌的生長過程中ahpC和ahpC/F的缺失加強了過氧化氫酶KatB的抗氧化途徑，OxyR調(diào)控了ahpC和katB的補償性表達(dá)，ΔahpCxoo和Δah