海豚鏈球菌莢膜相關基因cpsJ敲除突變株構建及其生物學特性研究.pdf

1、海豚鏈球菌（Streptococcus iniae，Siniae曾用名Streptococcus shiloi）是一種重要的水產養(yǎng)殖魚類病原菌，近年來由海豚鏈球菌感染導致的魚類疾病暴發(fā)頻見報端，為全球水產養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的經濟損失。莢膜是海豚鏈球菌重要的毒力因子，由多種多糖成分組成。海豚鏈球菌莢膜合成的操縱子由21個開放閱讀框構成。cpsJ是莢膜合成操縱子中一個重要的基因，它編碼一個尿苷二磷酸葡萄糖(UDP-Glc)差向異構酶，參與構成莢

2、膜的雜多糖的前體合成。
　　本文利用溫敏載體質粒pJRS233對cpsJ基因進行敲除，通過同源重組將cpsJ基因置換為氯霉素抗性基因，構建基因敲除突變株△cpsJ。然后分別對△cpsJ和野生型海豚鏈球菌進行革蘭氏染色并鏡檢、菌落觀察、生長率測定、粘附入侵試驗、全血殺滅試驗和攻毒試驗，對cpsJ的功能進行初步研究。
　　結果顯示突變株△cpsJ與野生型相比，在同等培養(yǎng)條件下，菌體形成的鏈長更長;同等培養(yǎng)條件下在THY平板上形成

3、的菌落外觀一致但直徑更小;在生長率測定試驗中，突變株的生長曲線到達平臺期時菌液OD600值為0.42，野生型為1.28;在粘附與入侵試驗中，突變株對鯉魚上皮瘤細胞(EPC)的粘附率為25.72％，野生型為1.35％;突變株對EPC的入侵率為1.72％，野生型為0.34％;在全血殺滅試驗中，突變株的存活率為45.94％，野生型為137.39％;在攻毒試驗中，腹腔注射突變株菌液的魚的存活率為75％，注射野生型菌液的魚的存活率為50％。