與濃縮蘋果汁后混濁有關(guān)的蛋白質(zhì)的分離純化與性質(zhì)研究.pdf

1、本論文從濃縮蘋果汁中分離純化并鑒定了與后混濁有關(guān)的蛋白質(zhì)，然后研究其性質(zhì)，建立模擬體系研究其與果汁后混濁的關(guān)系。主要結(jié)論如下： 1.采用DEAE-SepharoseFastFlow離子交換柱層析，試用不同的緩沖溶液和pH值純化果汁蛋白，實驗確立的純化條件為：0.02M醋酸鈉緩沖溶液，pH5.8；先用100mL0.02M醋酸鈉緩沖溶液將不吸附的蛋白質(zhì)洗下來，再用500mL0-0.5MNaCl溶液(溶于0.02M醋酸鈉緩沖溶液，pH

2、5.8)線性梯度洗脫；最后用100mL1MNaCl溶液(溶于0.02M醋酸鈉緩沖溶液，pH5.8)洗脫吸附較為牢固的蛋白質(zhì)；流速為2ml/min；每管收集4mL。 2.通過離子交換層析和SDS-PAGE，發(fā)現(xiàn)存在于濃縮蘋果汁中的蛋白質(zhì)組分主要有兩種，一種是蘋果本身的蛋白(蛋白Ⅰ)，另一種是果汁加工中的外源酶蛋白(蛋白Ⅱ)。蛋白Ⅰ分子量很小，在31kDa以下。蛋白Ⅱ分子量均大于31kDa。 3.膠內(nèi)酶切和肽質(zhì)量指紋譜(PM

3、E)鑒定的蛋白Ⅰ是一種類甜昧蛋白，分子量25697Da，等電點5.17，是一種酸性蛋白，屬于病程相關(guān)蛋白的一種，是成熟蘋果中的主要蛋白之一，能抵抗蛋白酶、低pH和高溫。N端具有糖基化位點，易于和多糖結(jié)合。其疏水性氨基酸含量高，易和多酚結(jié)合引發(fā)混濁。 4.二喹啉甲酸(BCA)法測得濃縮蘋果汁的蛋白質(zhì)含量在0.4-0.8g/L之間，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于Bradford法(0.1-0.2g/L)。說明BCA法更適合蘋果汁中蛋白質(zhì)含量的測定。

4、 5.采用從離子交換得到的蛋白Ⅰ建立不同濃度的蛋白質(zhì)-單寧酸模擬體系(pH3.7，0.02M磷酸鈉緩沖液)表明：隨著蛋白Ⅰ和單寧酸濃度的增加，其聚合后的濁度也增加，并且變化趨勢是固定蛋白Ⅰ或單寧酸的濃度，隨單寧酸或蛋白Ⅰ濃度的增加，濁度增加，增加到一最大值后又下降。說明蛋白Ⅰ和單寧酸的濃度以及二者的比例都對混濁有重要影響。 6.對蛋白Ⅱ(酶蛋白)進(jìn)行氨基酸組成分析，發(fā)現(xiàn)添加到果汁中的液化酶疏水性氨基酸含量低。通過建立果膠酶-單