1、臘梅花外型美觀，抗寒俱香，自古以來(lái)都具有極高的食用，藥用保健價(jià)值。本文以臘梅花為原料，采用室溫破碎提取，低溫有機(jī)溶劑脫色除雜沉淀，結(jié)合鹽析透析等步驟制備出一定蛋白質(zhì)純度的臘梅花蛋白粉，并考察了制備蛋白粉的抗氧化性能及淀粉酶、蛋白酶活性，擬定了純化制各路線，獲得了從臘梅花中提取制備活性蛋白粉的方法。文章對(duì)臘梅花中α-淀粉酶進(jìn)行了分離純化，獲得了一定的純化倍數(shù)及酶得率，考察了臘梅花中α-淀粉酶的最佳反應(yīng)溫度及pH。本文為深入分離開發(fā)該資源提
2、供了一定數(shù)據(jù)支持，其結(jié)論如下： (1)臘梅花中分離制備活性蛋白質(zhì)粉的工藝路線考察。首先比較了丙酮干粉法和緩沖液直接提取法對(duì)臘梅花中活性蛋白提取率的影響，選擇緩沖液直接提取法進(jìn)行粗蛋白液提取。進(jìn)一步以蛋白提取率為指標(biāo)，分別考察了離子強(qiáng)度、pH、溫度、料液比、提取時(shí)間等因素對(duì)提取率的影響，優(yōu)化了提取條件。在對(duì)粗蛋白液的純化過(guò)程中，考察了丙酮洗脫除雜、硫酸銨鹽析、透析除鹽等工藝對(duì)純化效果的影響。獲得蛋白提取工藝參數(shù)為：pH為7.2，溫
3、度為25℃，料液比(W∶V)為1∶6，離子強(qiáng)(NaCl)為0.2M，提取時(shí)間為4h可獲得最高的蛋白提取率，達(dá)到了31％。純化效果良好，產(chǎn)品為淺黃白色蛋白濃縮物，純度達(dá)到了66％。 (2)文章進(jìn)一步考察了制備臘梅花中蛋白質(zhì)粉抗氧化能力的強(qiáng)弱及淀粉酶、蛋白酶活性，以期對(duì)制備蛋白粉的生物活性功能及酶活性保存能力做出測(cè)評(píng)。結(jié)果顯示，未滅活制備蛋白粉自由基清除力達(dá)84.7％，蛋白成分滅活后為74.2％，清除率變化不大。在臘梅花水溶劑提取液
4、中，結(jié)果大致相同，未滅活提取液自由基清除率為93.2％，蛋白成分滅活后為81.4％，制備蛋白中蛋白質(zhì)抗氧化能力相對(duì)較弱。本章的實(shí)驗(yàn)結(jié)果同時(shí)揭示所制備的活性蛋白粉淀粉酶及蛋白酶活性得到了較好的保護(hù)和純化，其分別得到了3.62和1.49倍數(shù)的純化，其中淀粉酶比活力為262.94U·mg-1，蛋白酶比活力為12.32 U·mg-1。 (3)基于上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，臘梅花淀粉酶比活力達(dá)到了262.94U·mg-1，具有較高生物活性，對(duì)α一淀粉
5、酶進(jìn)行了分離純化，并對(duì)其最佳反應(yīng)溫度及pH進(jìn)行了測(cè)定。通過(guò)制備臘梅花丙酮干粉，硫酸銨分段鹽析，透析除鹽，聚乙二醇20000濃縮干燥，DEAE52纖維樹脂純化等步驟的考察，獲得DEAE52纖維樹脂對(duì)目標(biāo)酶最佳吸附洗脫條件為：最佳樹脂吸附pH為7.5，最佳洗脫離子強(qiáng)度為0.5M NaCl。通過(guò)DEAE-52樹脂吸附洗脫后，酶活得到了7.4倍的純化，酶得率為10.4％，得率較高，為一條理想的純化方案。通過(guò)對(duì)臘梅花中α—淀粉酶最佳反應(yīng)pH值和溫