Nrf2在小鼠非酒精性脂肪性肝病發(fā)病機(jī)制中的作用.pdf

1、核因子相關(guān)因子-2(Nrf2)與機(jī)體的防御系統(tǒng)密切相關(guān),是細(xì)胞防御氧化應(yīng)激的重要調(diào)節(jié)因子,通過介導(dǎo)一系列抗氧化酶和2相解毒酶的表達(dá),可以保護(hù)多種組織免受有害物質(zhì)的攻擊。研究表明Nrf2在肝臟的功能穩(wěn)定中起著重要的作用,可以降低藥物介導(dǎo)的肝臟毒性、減輕肝臟炎癥和肝纖維化、抑制化學(xué)致癌作用、并與肝細(xì)胞凋亡有關(guān)。深入研究可為治療疾病帶來新的途徑,故在本實(shí)驗(yàn)中,觀察Nrf2在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)形成不同階段表達(dá)的變化情況,為NAFL

2、D的預(yù)防和治療提供新的思路。
　　 目的：本實(shí)驗(yàn)通過喂養(yǎng)昆明小鼠高脂高膽固醇的方法建立NAFLD小鼠模型,研究在脂肪肝和脂肪性肝炎兩個階段,Nrf2的表達(dá)及血漿8-異前列腺素F2a的變化情況,探討Nrf2在氧化應(yīng)激所致炎癥損傷中的作用,為進(jìn)一步闡明NAFLD的發(fā)病機(jī)制及治療提供新的線索。
　　 方法：健康成年昆明雌性小鼠26只,正常飼養(yǎng)適應(yīng)環(huán)境1周后,隨機(jī)分成2組:正常飲食組(對照組)10只,普通飼料喂養(yǎng)；高脂飲食組(實(shí)

3、驗(yàn)組)16只,高脂飼料喂養(yǎng)。兩組均自由飲水和進(jìn)食分籠喂養(yǎng)于20-25℃明暗各12小時(shí)的動物實(shí)驗(yàn)室內(nèi),分別于8周末,12周末隨機(jī)抓取5只對照組小鼠和8只實(shí)驗(yàn)組小鼠,處死前隔夜禁食,次日稱重后以10％的水合氯醛(3.5ml/kg)腹腔注射麻醉,心臟穿刺取血,迅速摘取肝臟稱肝濕重,后用10％的甲醛固定,制作石蠟切片,常規(guī)HE染色,觀察肝臟組織的病理學(xué)變化,心臟血離心后取血清,應(yīng)用7170-AHITAC全自動生化儀檢測血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、總膽

4、紅素、血糖、甘油三酯、膽固醇；運(yùn)用免疫酶聯(lián)法檢測血漿中8-異前列腺素F2a的含量,用免疫組化法檢測Nrf2的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.對照組小鼠肝組織結(jié)構(gòu)完整、清晰,肝小葉結(jié)構(gòu)正常,中央靜脈大而壁薄,肝細(xì)胞排列成肝索,在中央靜脈周圍呈放射狀分布,細(xì)胞呈多邊形。8周模型組小鼠肝細(xì)胞中度細(xì)胞水腫,多數(shù)肝細(xì)胞內(nèi)可見大小不等、數(shù)量不一的脂滴空泡(脂肪變性),以小葉中央?yún)^(qū)受累明顯,伴有肝細(xì)胞水樣變性。12周模型組小鼠出現(xiàn)彌漫

5、性脂肪變性,呈現(xiàn)中至重度脂肪變性,小葉內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤,浸潤細(xì)胞以單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞為主,并有一些中性粒細(xì)胞浸潤以及散在的點(diǎn)狀壞死,匯管區(qū)炎癥相對較輕但未見明顯的纖維化改變。
　　 2.與對照組比較,8周模型組和12周模型組肝濕重量、肝指數(shù)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、血糖、膽固醇均有顯著升高(p<0.01),總膽紅素、甘油三酯水平差異不顯著。
　　 3.對照組小鼠正常肝細(xì)胞中,Nrf2在極少數(shù)肝細(xì)胞胞漿中表達(dá),8周實(shí)驗(yàn)組小鼠肝細(xì)胞

6、中,Nrf2在受損肝細(xì)胞胞漿中較強(qiáng)表達(dá),12周實(shí)驗(yàn)組小鼠肝細(xì)胞中,Nrf2在受損肝細(xì)胞胞漿中強(qiáng)表達(dá),實(shí)驗(yàn)組小鼠8,12周末肝細(xì)胞胞漿Nrf2表達(dá)明顯強(qiáng)于同期對照組小鼠(p<0.05),且12周末明顯強(qiáng)于8周末(p<0.05).4.與對照組比較,8周模型組和12周模型組血漿8-異前列腺素F2a明顯升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.采用高脂飼料喂養(yǎng)可以成功復(fù)制小鼠NAFLD模型,造模方法簡便易行