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文檔簡介
1、目的:以青果和青梔子為原料提取純化高純度鞣花酸和梔子苷提取物,以此制備一種同時載鞣花酸和梔子苷的復方納米脂質超聲微泡,并通過動物實驗評價其顯影效果。
方法:采用高效液相色譜法測定青果藥材中的鞣花酸,以及青梔子藥材中的梔子苷的含量。以青果和梔子為原料,采用單因素實驗分別考察藥材顆粒度、提取溶劑、溶劑濃度、提取溫度、料液比、提取時間等對鞣花酸和梔子苷粗提物純度的影響。采用高速逆流色譜和大孔樹脂純化鞣花酸和梔子苷,以獲得高純度提取物
2、。按一定比例,將鞣花酸精提物、梔子苷精提物、二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二棕櫚酰磷脂酸(DPPA)、甘油及磷酸鹽緩沖液(PBS)混勻,以全氟丙烷為包裹氣體,采用機械振蕩法制備納米脂質超聲微泡。通過光學顯微鏡及電子顯微鏡考察微泡的形態(tài)、分散度、均一性及濃度,利用激光粒徑檢測儀及表面電位檢測儀分別檢測微泡的粒徑大小及分布、表面電位等物理特性;采用高效液相色譜檢測包封率和載藥量,并作初步穩(wěn)定性研究。經(jīng)兔耳
3、緣靜脈注入自制納米脂質超聲微泡,采用自身前后對照的方法,觀察兔肝臟部位及肝臟腫瘤部位超聲顯影效果,為超聲定位靶向給藥提供了直接可靠的依據(jù)。
結果:以鞣花酸和梔子苷為對照品,采用高效液相色譜法測定了青果和青梔子中鞣花酸和梔子苷的含量。鞣花酸和梔子苷分別在0.043~2.160μg、0.419~20.934μg濃度范圍內(nèi)線性關系良好。其精密度、穩(wěn)定性和重復性的RSD均低于3%。鞣花酸平均回收率為97.69%,RSD=1.17%(n
4、=9),梔子苷的平均回收率為98.75%,RSD=0.81%(n=9)。通過單因素試驗獲得青果中鞣花酸的最佳提取工藝為:將青果粉碎為細粉,加入料液比為1∶12(g∶mL)的80%的丙酮溶液,80℃回流提取2h,最后得到純度為16.52%的鞣花酸粗提物。青梔子中梔子苷的最佳提取工藝為:將青梔子粉碎為細粉,加入料液比為1∶5(g∶mL)的70%的乙醇溶液,80℃回流提取3h,最后得到純度為35.78%的梔子苷粗提物。以異丙醇∶正丁醇∶水=1
5、∶2∶3為溶劑系統(tǒng),采用高速逆流色譜分離純化青果中鞣花酸粗提物,一次分離純化,從100g青果中得到的純度為93.67%的鞣花酸精提物1.82 g,得率為77.08%。采用X-5大孔樹脂純化梔子苷粗提物,從100g青梔子中得到的純度為91.26%的梔子苷精提物11.37 g,得率為85.69%。自制載鞣花酸和梔子苷的納米脂質微泡大小均勻,平均粒徑為(526.8±96.4) nm,平均表面電位為-(5.3±0.9) mV,平均濃度為(3.8
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