RNA干擾抑制馬桑內酯誘導的鼠腦星形膠質細胞MDR1表達的研究.pdf

1、癲癇是最常見的神經系統(tǒng)疾病之一，而約1/3的患者是難治性癲癇。盡管近年來新型抗癲癇藥物不斷應用于臨床，但難治性癲癇的治療并沒有明顯改觀。目前廣為關注的一個因素是血腦屏障和血腦脊液屏障的血管內皮細胞及星形膠質細胞等多重耐藥蛋白的過度表達。P-gP(P-glyc9protein)是多藥耐藥蛋白家族中重要一員，具有藥物泵的作用，它限制了抗癲癇藥物進入腦內，而且也使到達癇性神經元及其周圍組織的藥物濃度降低，抗癲癇治療失敗。本試驗用siRNA-h

2、airpin表達載體p-SIREN shuttle質粒轉染馬桑內酯誘導的已表達P-gP蛋白的星形膠質細胞，并檢測RNAi抑制MDRlmRNA和P-gp的表達以及耐藥的逆轉。 方法：用siRNA-hairpin表達載體p-SIREN shuttle質粒轉染馬桑內酯誘導的已表達多重耐藥蛋白的星形膠質細胞。通過熒光定量PCR測定MDRlmRNA的量，免疫細胞化學的方法檢測P-gp蛋白表達的變化，流式細胞儀檢測轉染前后細胞內P-gp蛋

3、白作用底物羅丹明蓄積外排的變化。 結果：我們建立了表達P-gp耐藥蛋白的星形膠質細胞模型，并有效地將表達shRNA的pSIREN shuttle質粒載體轉染該細胞模型。轉染后試驗組細胞MDRl mRNA水平被抑制達67.70％(p<0.01)，P-gp表達水平明顯低于對照組(P<0.01)，試驗組P-gp作用底物羅丹明的細胞外泵出率23.08％明顯低于對照組78.35％(p<0.01)。 結論：本實驗說明RNAi方法