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文檔簡介
1、本研究從行為學、電生理學等角度分別觀察了耳針對癲癇大鼠行為學表現(xiàn),NTS神經(jīng)元放電,硬膜外腦電圖(electroencephalogram,EEG)的影響,以及局部冷凍NTS對耳針抗癲癇效應(yīng)的影響,和應(yīng)用交感興奮劑、拮抗劑對癲癇大鼠EEG的影響,試圖從耳一迷走反射的角度探討耳針抑制癲癇的作用機制。 實驗一、耳針預(yù)處理對戊四氮致癲癇大鼠行為學表現(xiàn)的影響。 1.1實驗動物:健康成年Sprague-Dawley雄性大鼠42只,
2、體重300±28g,由中國醫(yī)學科學院實驗動物中心提供,清潔級。 1.2實驗過程:將動物分為3組。模型組(n=14)給予大鼠腹腔注射戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)60 mg/kg造成急性癲癇模型,后觀察30 min大鼠行為學的表現(xiàn),耳甲治療組(n=15)和大椎治療組(n=13)分別在造模前電針耳甲或“大椎”穴30 min,后立即腹腔注射PTZ,觀察30 min大鼠行為學的表現(xiàn)。行為學表現(xiàn)根據(jù)Racine分級標
3、準進行評分。電針刺激參數(shù):強度,1 mA;頻率,20 Hz;脈寬,500 μs;刺激30 s,間隔5 min,持續(xù)30 min。 1.3實驗結(jié)果:模型組大鼠腹腔注射PTZ 40s左右出現(xiàn)癲癇發(fā)作,開始表現(xiàn)為小發(fā)作,如凝視,點頭運動,雙前肢抬起,陣攣等,1-2 min出現(xiàn)大發(fā)作,表現(xiàn)為后肢伸直,抽搐,跌倒伴翻滾,持續(xù)約9.5 s,PTZ后30 min內(nèi)大鼠有1-2次大發(fā)作,多次小發(fā)作。與模型組比較,大椎治療組和耳甲治療組動物大發(fā)作
4、潛伏期(即從腹腔注射PTZ到大鼠出現(xiàn)第一次大發(fā)作的時間)延長(P<0.05,P<0.01),行為學評分減少(P<0.05,P<0.01).與大椎治療組比較,除了在首次大發(fā)作持續(xù)時間上無顯著差異(P>0.05),耳甲治療組大發(fā)作潛伏期延長(P<0.01),行為學評分亦減少(P<0.01).結(jié)果提示:針刺預(yù)處理可以抑制大鼠癲癇發(fā)作,而且電針耳甲抑制癲癇的效應(yīng)優(yōu)于電針“大椎”穴的效應(yīng)。 實驗二、耳針對癲癇大鼠孤束核神經(jīng)元細胞外放電和腦
5、電圖的影響。 2.1實驗動物:健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠45只,體重300±34g,清潔級,由中國醫(yī)學科學院實驗動物中心提供。 2.2實驗過程:手術(shù)及實驗過程中動物體溫用計算機溫度時間控制儀維持在37℃。 大鼠麻醉后仰臥,頸部正中切口,游離左側(cè)迷走神經(jīng)干1 cm,將自制C型雙極銀質(zhì)電極刺激端無張力地鉤于迷走神經(jīng)干上用以刺激迷走神經(jīng),縫合傷口。然后俯臥,將大鼠頭部用耳棒固定于腦立體定位儀上,根據(jù)大
6、鼠腦立體定位圖譜(Paxinos和Watson,1998),在前囟前(A:1.0 mm,L:1.0 mm)和前囟后(A:-1.0 mm,L:1.0 mm)及NTS(A:-11.3~-14.3 mm,L:0~2.3 mm,H:4~7 mm)對應(yīng)顱骨表面,用顱骨鉆鉆孔,暴露硬腦膜。雙銀球電極置于前囟前、后各一小孔內(nèi)硬腦膜上用以記錄EEG。顯微鏡下分離NTS對應(yīng)處小孔硬腦膜和軟腦膜,暴露小腦皮層,玻璃微電極(阻抗10-20 MΩ)記錄NTS神
7、經(jīng)元放電. 2.3實驗結(jié)果: 2.3.1造模前后孤束核神經(jīng)元放電頻率和腦電圖的同步變化造模前后共觀察到31個細胞。造模后26個細胞放電頻率降低(83.87%),3個細胞放電頻率不變(9.68%),2個細胞放電頻率增多(6.45%).經(jīng)統(tǒng)計學處理:NTS細胞放電頻率造模前為9.48±0.76個/秒,造模后為4.69±0.36個/秒。其中26個放電頻率降低的細胞,其放電頻率的變化和腦電圖的變化存在同步性,即在細胞放電頻率降低
8、時,EEG出現(xiàn)高幅癲癇波,當細胞放電頻率增加時,EEG癲癇波消失或振幅降低.說明當NTS細胞放電頻率減少時,動物癲癇發(fā)作,NTS細胞放電頻率增多時,癲癇的發(fā)作消失或減少。這種同步變化在造模后1-3分鐘之內(nèi)開始出現(xiàn),呈節(jié)律性變化,按EEG每出現(xiàn)一次癲癇波記為一次癲癇發(fā)作,最初發(fā)作3次/分,2秒/次,約7-10分鐘內(nèi)持續(xù)增多,在約15分鐘后,呈基本有規(guī)律的變化,平均發(fā)作約6.21±0.48次/分,持續(xù)時間4.32±0.23秒/次,每分鐘發(fā)作
9、總的持續(xù)時間為26.83±2.25秒。 實驗三、耳針對癲癇大鼠行為學表現(xiàn)、孤束核場電位、皮層場電位的影響。 3.1實驗動物:健康成年雄性Spraguc-Dawley大鼠124只,體重298±31g,清潔級,由中國醫(yī)學科學院實驗動物中心提供。 3.2實驗過程: 3.2.1單電極記錄耳針對癲癇大鼠皮層場電位的影響(急性實驗)手術(shù)過程中動物體溫用計算機溫度時間控制儀維持在37℃。大鼠12只,麻醉后俯臥。根據(jù)大鼠
10、腦立體定位圖譜,暴露初級體感皮層(SI)(A:-3~-6 mm;L:4~6 mm:H:1.5 mm),用單根直徑為50μ的金屬微電極記錄癲癇大鼠SI場電位(FPs),分別觀察5個部位耳針(包括耳甲腔、耳甲艇、耳垂、耳郭外緣中點、耳尖)30 s前后癲癇大鼠SI FPs的變化.電針刺激參數(shù):強度,1 mA;頻率,20 Hz;脈寬,500μ s;刺激30s. 3.2.2單電極記錄耳針對癲癇大鼠行為學表現(xiàn)、皮層場電位影響(慢性實驗)大鼠
11、50只,根據(jù)外耳5個刺激部位分為5組,每組10只.手術(shù)前部分同3.2.1,將金屬微電極推進至SI后,牙托水泥固定電極,動物清醒并恢復一周后,分別觀察5個部位耳針30 min后癲癇大鼠行為學表現(xiàn)和SI FPs的變化。電針刺激參數(shù):強度,1 mA;頻率,20 Hz;脈寬,500μs;刺激30 s,間隔5 min,持續(xù)30 min. 3.3實驗結(jié)果: 3.3.1單電極記錄耳針對癲癇大鼠皮層場電位的影響(急性實驗)電針耳甲腔(n
12、=14)后,發(fā)作持續(xù)時間從26.15±2.31秒減少到5.07±0.64秒,減少了21.08±2.06秒(P<0.01);電針耳甲艇(n=13)后,發(fā)作持續(xù)時間從25.98±2.17秒減少到4.97±0.43秒,減少了21.01±1.97秒(P<0.01);電針耳垂(n=13)后,發(fā)作持續(xù)時間從26.29±2.24秒減少到19.28±1.53秒,減少了7.01±0.82秒(P<0.01);電針耳郭外緣中點(n=11)后,發(fā)作持續(xù)時間從2
13、6.38±2.37秒減少到22.16±1.98秒,減少了4.02±0.35秒(P<0.01);電針耳尖(n=10)后,發(fā)作持續(xù)時間從26.41±2.23秒減少到19.78±1.62秒,減少了6.63±0.47秒(P<0.01).每個部位電針前后大鼠癲癇發(fā)作總的持續(xù)時間比較,差異有統(tǒng)計學意義,說明耳針能明顯抑制大鼠癲癇發(fā)作. 實驗四、物理冷凍孤束核對耳針抗癲癇效應(yīng)的影響。 4.1實驗動物健康成年雄性Sprague-Dawl
14、ey大鼠10只,體重300±30g,清潔級,由中國醫(yī)學科學院實驗動物中心提供。 4.2實驗過程:手術(shù)及實驗過程中動物體溫用計算機溫度時間控制儀維持在37℃。雙銀球電極記錄硬腦膜外EEG。沿大鼠項部正中切開皮膚,充分暴露閂部,并保持閂部水平.將U型管固定于微推進器,用微推器將U型管底部輕輕接觸于孤束核在延髓投影區(qū),即閂部區(qū)域。 4.3結(jié)果: 造模前,孤束核冷凍前、冷凍時、及冷凍后EEG無明顯變化。腹腔注射PTZ造模
15、后,同一刺激部位電針前后發(fā)作持續(xù)時間的差值比較:冷凍NTS中與冷凍NTS前比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);撤除冷凍NTS 5 min后與冷凍NTS前比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05).結(jié)果表明冷凍NTS時,耳針抑制癲癇的效應(yīng)減弱,撤除冷凍5 min后,耳針抑制癲癇的效應(yīng)恢復。說明NTS的功能受損削弱了耳針抗癲癇的效應(yīng). 實驗五、靜脈注射鹽酸腎上腺素,心得安對癲癇大鼠腦電圖的影響。 5.1實驗動物:健康成年雄性
16、Sprague-Dawley大鼠10只,體重300±30g,清潔級,由中國醫(yī)學科學院實驗動物中心提供. 5.2實驗過程:手術(shù)及實驗過程中動物體溫用計算機溫度時間控制儀維持在37℃.雙銀球電極記錄硬膜外EEG.股靜脈插管,以備靜脈用藥,造模成功后,給予大鼠股靜脈注射鹽酸腎上腺素或心得安,觀察藥物對癲癇大鼠EEG的影響。 5.3結(jié)果 癲癇發(fā)作較少時靜脈注射腎上腺素,可以加劇癲癇的發(fā)作;當癲癇發(fā)作頻繁時靜脈注射心得安,
17、可以抑制癲癇的發(fā)作. 結(jié)論: 本項研究從行為學和電生理的角度探討了耳針治療癲癇的效應(yīng)機制。實驗結(jié)果表明:癲癇的發(fā)病表現(xiàn)為行為學發(fā)作和腦電圖的高幅癲癇波,同時可能伴有自主神經(jīng)系統(tǒng)功能的失衡.針刺特別是耳針能明顯改善癲癇大鼠的行為學表現(xiàn),這種作用可能通過激活NTS的活動來增強副交感的功能從而去同步化腦電,最終抑制癲癇發(fā)作.刺激耳甲的急性抗癲癇效應(yīng)與VNS的急性抗癲癇效應(yīng)相比無顯著性差異,且明顯優(yōu)于刺激其它部位的效應(yīng),可能與耳
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