黃芪、水蛭、大黃及其復(fù)方影響大鼠MsC產(chǎn)生FN及Bax、Bcl-2的研究.pdf

1、　　目的 以黃芪、水蛭、大黃及其復(fù)方(黃芪、水蛭、大黃、黨參、川芎)具有代表性藥物作為研究對(duì)象,以系膜細(xì)胞增生作為作用的靶點(diǎn),以在腎臟病發(fā)生發(fā)展中具有代表性的、學(xué)術(shù)界公認(rèn)的分子生物學(xué)指標(biāo) FN 和凋亡調(diào)控基因 Bax、Bcl-2為檢測(cè)目標(biāo)。觀察黃芪、水蛭、大黃及復(fù)方含藥血清對(duì)脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)誘導(dǎo)下體外培養(yǎng)的大鼠腎小球系膜細(xì)胞(Mesangial Cells,MsC)表達(dá)纖維連接蛋白(fibrone

2、ctin,FN) 的強(qiáng)弱,對(duì)凋亡調(diào)控基因 Bax、Bcl-2 的影響和促進(jìn)MsC凋亡作用的強(qiáng)弱。
　　方法 在大鼠原代腎小球系膜細(xì)胞體外培養(yǎng)的基礎(chǔ)上,利用 LPS誘發(fā)大鼠腎小球系膜細(xì)胞增生的模型。采用 ELISA 法檢測(cè)黃芪、水蛭、大黃及其復(fù)方對(duì) MsC 表達(dá)FN的影響,實(shí)驗(yàn)中將系膜細(xì)胞分為九組：控制組、模型組、對(duì)照組、黃芪組、水蛭組、大黃組、雷公藤多甙組,復(fù)方組、復(fù)方+雷公藤多甙組；采用免疫組化法檢測(cè)凋亡調(diào)控基因 Bax、Bc

3、l-2,并測(cè)得凋亡細(xì)胞數(shù),實(shí)驗(yàn)中將系膜細(xì)胞分為七組：對(duì)照組、黃芪組、水蛭組、大黃組、雷公藤多甙組,復(fù)方組、復(fù)方+雷公藤多甙組；并經(jīng)高效液相色譜檢測(cè)大鼠血漿中是否含有黃芪、大黃、水蛭、雷公藤多甙片的主要成分毛蕊異黃酮葡萄糖苷、大黃酸和大黃素、次黃嘌呤、雷公藤甲素。
　　結(jié)果 在抑制MsC產(chǎn)生FN方面：水蛭組抑制作用強(qiáng)于黃芪組和大黃組,有顯著性差異(P<0.05)；大黃組與黃芪組相比,優(yōu)于黃芪組,有顯著性差異；水蛭組與雷公藤多甙組和

4、復(fù)方組作用相近,三者比較無顯著性差異；復(fù)方+雷公藤多甙組作用最佳,與其他各組相比均有顯著性差異(P<0.05)。免疫組化法標(biāo)記MsC的凋亡調(diào)控基因Bax、Bcl-2方面：標(biāo)記出含促凋亡蛋白Bax的細(xì)胞率上水蛭組和大黃組明顯高于黃芪組,有顯著性差別( P<0.0024)；復(fù)方組標(biāo)記出含促凋亡蛋白Bax的細(xì)胞率與單味中藥組相比,高于單味中藥組,有顯著性差異( P<0.0024)；以復(fù)方+雷公藤多甙組標(biāo)記出含促凋亡蛋白 Bax 的細(xì)胞率最高；

5、而各含藥血清組在標(biāo)記出含抑制凋亡蛋白 Bcl-2的細(xì)胞率與Bax大致相反。各含藥血清組MsC凋亡率之間的比較：水蛭組和大黃組明顯優(yōu)于黃芪組,有顯著性差別( P<0.0024)；復(fù)方組與單味中藥組相比,均優(yōu)于單味中藥組可明顯促進(jìn)系膜細(xì)胞凋亡,有顯著性差別(P<0.0024),以復(fù)方+雷公藤多甙組作用最佳,與其他各組相比均有顯著性差異(P<0.0024)。經(jīng)高效液相色譜測(cè)定大鼠血漿中含有黃芪、大黃、水蛭、雷公藤多甙片的主要成分毛蕊異黃酮葡萄

6、糖苷、大黃酸和大黃素、次黃嘌呤、雷公 藤甲素。
　　結(jié)論 各含藥血清組均能明顯降低經(jīng)LPS刺激后體外培養(yǎng)的大鼠MsC產(chǎn)生FN的含量,以復(fù)方+雷公藤多甙組作用最佳,水蛭組抑制作用較強(qiáng),優(yōu)于黃芪組；在促進(jìn)大鼠 MsC凋亡方面,仍以復(fù)方+雷公藤多甙組作用最佳,水蛭組和大黃組作用較強(qiáng),優(yōu)于黃芪組。得出活血化瘀水蛭在抑制系膜細(xì)胞增生,促進(jìn)系膜細(xì)胞凋亡方面效果優(yōu)于益氣類中藥黃芪,也間接說明治療系膜增生性腎小球腎炎以復(fù)方+雷公藤多甙效果最優(yōu)。