人參皂甙Rg1對(duì)成人軟骨細(xì)胞增殖及堿性成纖維樣生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響.pdf

1、目的:在臨床上,由外傷或疾病引起的關(guān)節(jié)軟骨損傷很常見,多為成年人和老年人,尤其是骨關(guān)節(jié)炎病,在老年人中更為常見。由于軟骨組織中不具有血管與神經(jīng),其損傷后難以自我恢復(fù)。區(qū)別以往的實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象大多為動(dòng)物或者人胚胎的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞,我們以成人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞為研究對(duì)象,在人參皂甙Rg1的單獨(dú)作用下,通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞計(jì)數(shù)、Ⅱ型膠原免疫組化等觀察檢測(cè)手段,了解單獨(dú)應(yīng)用人參皂甙Rg1對(duì)其增殖的促進(jìn)作用,并于培養(yǎng)第七天用ELISA法測(cè)定堿性成纖維樣生長(zhǎng)

2、因子(bFGF)的表達(dá),為研究人參皂甙Rg1對(duì)成人關(guān)節(jié)軟骨的體外培養(yǎng)擴(kuò)增機(jī)制提供理論依據(jù)。
　　方法:①成人關(guān)節(jié)軟骨分離、培養(yǎng)。②倒置顯微鏡下觀察軟骨細(xì)胞生長(zhǎng)狀況,并對(duì)培養(yǎng)的1至4代的軟骨細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),繪制生長(zhǎng)曲線。③細(xì)胞計(jì)數(shù)繪制生長(zhǎng)曲線,觀察在人參皂甙Rg1作用下軟骨細(xì)胞的增殖情況。④倒置顯微鏡下觀察人參皂甙Rg1作用下軟骨細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。⑤免疫組織化學(xué)法觀察人參皂甙Rg1對(duì)軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原表達(dá)的影響。⑥用ELISA法測(cè)定細(xì)

3、胞上清液,全細(xì)胞,裂解細(xì)胞上清液及裂解細(xì)胞的bFGF表達(dá)。⑦采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)、單因素方差分析及重復(fù)測(cè)量因素方差分析,應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果:①原代關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞接種6小時(shí)后開始貼壁,培養(yǎng)72小時(shí)后大部分細(xì)胞貼壁,形態(tài)由球形逐漸向外伸展出突起而轉(zhuǎn)變?yōu)槎噙呅?。隨著細(xì)胞增殖數(shù)量增加,體積逐漸增大,細(xì)胞形態(tài)也慢慢趨于一致。②實(shí)驗(yàn)細(xì)胞接種后出現(xiàn)潛伏期,對(duì)照組自第3天起細(xì)胞也進(jìn)入對(duì)數(shù)增殖期,到第7天細(xì)胞數(shù)約為

4、接種時(shí)的8倍。藥物組自第2天~3天起細(xì)胞增殖能力增強(qiáng),到第7天細(xì)胞數(shù)約為接種時(shí)的15倍,明顯高于對(duì)照組(P=0.00<0.05)。所以我們認(rèn)為,人參皂甙Rg1對(duì)軟骨細(xì)胞的增殖具有促進(jìn)作用。③免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示:藥物組和對(duì)照組均可見Ⅱ型膠原表達(dá),胞漿染成棕色,細(xì)胞接觸部分可見較淺棕色。藥物組與對(duì)照組沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.625、0.800>0.05)。④ELISA法測(cè)定藥物組細(xì)胞上清液,全細(xì)胞,裂解細(xì)胞上清液及裂解細(xì)胞的bFGF表達(dá)均