曲尼斯特對糖尿病腎病腎小管上皮—間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的影響.pdf

1、目的:前期研究證實(shí)曲尼斯特能降低糖尿病腎病(DN)大鼠模型腎組織細(xì)胞外基質(zhì)(FN和Col-1)的表達(dá)，抑制腎間質(zhì)纖維化。本課題擬通過構(gòu)建DN模型，觀察DN早期上皮細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化(EMT)相關(guān)指標(biāo)上皮細(xì)胞E-鈣粘素(E-cadherin)和α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)的表達(dá)情況，應(yīng)用曲尼斯特進(jìn)行干預(yù)，研究曲尼斯特對DN早期EMT的影響，探討曲尼斯特抗DN腎間質(zhì)纖維化的作用機(jī)理，為臨床使用曲尼斯特治療DN，驗(yàn)證其延緩其腎功能進(jìn)展

2、的作用。
　　方法:建立DN大鼠模型:SD大鼠隨機(jī)分為正常對照組(n=6)、DN模型組，曲尼斯特低劑量和高劑量治療組(n=24)。采用高糖高脂飼料喂養(yǎng)聯(lián)合低劑量STZ注射（STZ溶于0.1 mol/L枸櫞酸鹽緩沖液中，pH值4.5）誘發(fā)SD大鼠DN模型，對照組只注射同等量的枸櫞酸鹽緩沖液，72h后測定各組大鼠血糖和尿糖，血糖值≥16.7mmol/L，尿糖值+++～++++者確定為糖尿病腎病模型。建模成功后，曲尼斯特治療組分別按照低

3、劑量組和高劑量組予以曲尼斯特(200mg/kg/d和400mg/kg/d)分2次灌胃。第8周末處死大鼠，取部分腎組織置于4％中性甲醛溶液中固定，采用免疫組化法觀察各組大鼠腎小管E-cadherin和α-SMA的表達(dá)及分布情況;留取部分腎組織提取組織總蛋白，用Western blot方法檢測E-cadherin和α-SMA蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1.免疫組化提示:正常大鼠腎小管上皮細(xì)胞可見明顯的E-cadherin的表

4、達(dá)，未見α-SMA表達(dá)，DN模型組腎小管上皮細(xì)胞E-cadherin的表達(dá)較正常對照組減少，并可見α-SMA表達(dá)，曲尼斯特可以一定程度的抑制這一過程。
　　2.Western blot結(jié)果提示:與正常對照組相比，DN大鼠模型早期α-SMA表達(dá)升高，E-cadherin表達(dá)降低，曲尼斯特可呈劑量依賴性的抑制它們的改變。
　　結(jié)論:
　　(1)DN大鼠早期腎小管上皮細(xì)胞可出現(xiàn)EMT。
　　(2)曲尼斯特可在一定程度上