腦活素、NGF對(duì)人類缺氧缺血SVZ的神經(jīng)保護(hù).pdf

1、目的研究缺氧缺血(hypoxicischemic，m)對(duì)妊娠中期人類胚胎腦腦室管膜下區(qū)(subventricularzone，SVZ)神經(jīng)干細(xì)胞(neuralstemcells，NSCs)、神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)祖細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞)的影響，比較不同細(xì)胞對(duì)HI損傷的耐受性差異，揭示缺氧缺血腦損傷(Hypoxic—ischemicbraindamaged，m叻)及其它發(fā)育腦損傷性疾病的多種腦功能障礙表現(xiàn)的細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)。探

2、討腦活素、NGF對(duì)HI損傷的SVZ神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用，為臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)及理論依據(jù)。 方法取妊娠17-22孕周(gestationalweeks，gw)的健康胚胎腦5例，即刻解離出SVZ細(xì)胞，以氧糖缺失法(oxygen／glUcosedeprivation，OGD)[1]建立H工損傷模型，計(jì)算m組和正常組細(xì)胞成活率。將HI組和正常組SVZ細(xì)胞按A藥(NGF)、B藥(腦活素)兩因素，用藥、不用藥兩個(gè)水平，交叉分成4組培養(yǎng)，培養(yǎng)4小

3、時(shí)后以細(xì)胞特異性標(biāo)志蛋白nestin、MAP2、GFAP、PDGFRQ及RC120，的抗體通過(guò)免疫熒光細(xì)胞化學(xué)法鑒定SVZ的5種主要細(xì)胞：NSCs、神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)祖細(xì)胞及小膠質(zhì)細(xì)胞。比較HI組和正常組5種細(xì)胞含量的改變，分析兩藥對(duì)HI和正常組SVZ細(xì)胞總數(shù)、對(duì)HI組SVZ神經(jīng)元數(shù)的影響。 結(jié)果妊娠中期人類胚胎腦SVZ中含有15．08±0．02％的nestin(+)NSCs、48．81±O．03％的MAP2(+)神

4、經(jīng)元、32．3l±0．03％的GFAP(+)星形膠質(zhì)細(xì)胞、6．92±O．02％的PDGFRQ(+)少突膠質(zhì)祖細(xì)胞和1．15±O．01％的RCA,2,。(+)小膠質(zhì)細(xì)胞。 細(xì)胞成活率：HI組為63．41±O．06％，正常組為98．9±O．01％。HI組細(xì)胞成活率明顯低于正常組，差異具有顯著性(p<0．001)，提示HI后SVZ細(xì)胞損傷明顯。 5種SVZ細(xì)胞的百分含量結(jié)果比較：nestin(+)的NSCs分別占HI組和正常對(duì)

5、照組SVZ細(xì)胞的22．47±0．03％、15．08±O．02％，GFAP(+)的星形膠質(zhì)細(xì)胞分別占56．48±0．03％、32．3l±0．03％，RCA120(+)的小膠質(zhì)細(xì)胞分別占3．16±0．01％、1．15±0．01％，HI組中NSCs、星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞的百分含量明顯高于正常對(duì)照組(p

6、的少突膠質(zhì)祖細(xì)胞分別含1．19±0．0l、6．92±O．02％，HI組中神經(jīng)元、少突膠質(zhì)祖細(xì)胞的含量明顯低于正常對(duì)照組(p＜0．001)。提示SVZ中nestin(+)NSCs、GFAP(+)星形膠質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞的抗HI損傷能力強(qiáng)于MAP2(+)神經(jīng)元、PDGFRQ(十)少突膠質(zhì)祖細(xì)胞。 NGF、腦活素對(duì)SVZ神經(jīng)元、SVZ總細(xì)胞的存活數(shù)量影響的析因分析結(jié)果：對(duì)HI組的神經(jīng)元：NGF、腦活素的主效應(yīng)、交互作用均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

7、(FSGF=3502．62，p＜O．01；F腦活素=910．67，p＜0．01：F交互=206．45，p＜O．01)。對(duì)m組SVZ的總細(xì)胞：NGF和腦活素的主效應(yīng)都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(FNGF=11．168，p＜O．01：F腦活素=7．367，p＜O．05)，兩藥交互作用不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F交互=1．276，p＞O．05)；對(duì)正常組SVZ的總細(xì)胞：兩藥的主效應(yīng)、交互作用均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(FNGF=1．83，p>0．05；F腦活素=0．44，p>

8、0．05：F交互=0．96，p>0．05)。 結(jié)論妊娠中期人類胚胎腦SVZ含有nestin(+)NSCs、MAP2(+)神經(jīng)元、GFAP(+)星形膠質(zhì)細(xì)胞、PDGFRa(+)少突膠質(zhì)祖細(xì)胞和RCA,2,，(+)小膠質(zhì)細(xì)胞。SVZ細(xì)胞對(duì)HI損傷敏感，不同SVZ神經(jīng)細(xì)胞對(duì)HI損傷的耐受性不同：NSCs、星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)HI損傷的耐受性相對(duì)較強(qiáng)；神經(jīng)元、少突膠質(zhì)祖細(xì)胞對(duì)HI耐受性較弱。NGF和腦活素可提高m損傷后存活的SVZ神經(jīng)元數(shù)量和