影響山羊活體采卵與體外受精效果的研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)針對(duì)如何提高腹腔鏡進(jìn)行山羊活體采卵和體外受精效果開(kāi)展了多方面的研究，以便完善“活體采卵一體外受精”生產(chǎn)體外胚胎的技術(shù)體系，進(jìn)而提高體外胚胎生產(chǎn)的效率。 用屠宰廠采集的卵巢作為實(shí)驗(yàn)材料，比較不同型號(hào)的采卵針對(duì)卵母細(xì)胞回收效果的影響，結(jié)果表明采卵針型號(hào)對(duì)卵母細(xì)胞回收率和可用率均有較大影響。9號(hào)和12號(hào)針的回收率分別為66．78％和62.41％顯著高于7號(hào)針的52.63％(P<0．05)；可用率分別為63．59％和68．82％也

2、顯著高于7號(hào)針的55％(P<0．05)。9號(hào)與12號(hào)針在卵母細(xì)胞回收率，可用率方面差異均不顯著(P>0．05)，說(shuō)明這兩種型號(hào)的針較適宜作為山羊活體采卵用針。采用間隔兩周，重復(fù)三次的采卵方案，比較常規(guī)手術(shù)法與腹腔鏡法活體采卵(LOPU Laparoscopic Ovum Pick-up)對(duì)活體采卵效果及供試羊生殖器官．損傷的影響。結(jié)果表明常規(guī)手術(shù)法采卵與LOPU在卵母細(xì)胞回收率(76．47％對(duì)74．81％)及可用率(75．24．％對(duì)72

3、.45％)方面差異不顯著(P>0．05)。但常規(guī)手術(shù)法對(duì)供試羊的生殖器官損傷較大，第三次采卵時(shí)全部發(fā)生粘連，對(duì)采卵操作產(chǎn)生了較大影響。將供試羊分為三組，重復(fù)三次LOPU，比較不同采卵間隔時(shí)間對(duì)活體采卵效果及供試羊生殖器官損傷情況的影響，結(jié)果間隔一周的每次每只卵泡數(shù)(12.08個(gè))、每次每只獲卵數(shù)(8．75個(gè))，均顯著低于間隔兩周(15．58個(gè)，11．97個(gè))和三周組(14．92個(gè)、11．42個(gè))(P<0．05)。卵母細(xì)胞回收率(分別為7

4、2.4．1％、76．47％、78．29％)與可用卵率(分別為74．28％、75．24％、74．45％)三組間無(wú)顯著差異(P>0．05)。間隔一周重復(fù)活體采卵對(duì)卵巢的損傷較大，卵巢表面有較多的血斑；間隔2周組卵巢基本能夠恢復(fù)正常，但卵巢表面也有少量的血斑；間隔3周組卵巢能夠恢復(fù)正常。綜合考慮活體采卵的間隔時(shí)間以兩周為宜。 山羊體外受精研究的結(jié)果表明：成熟液中添加10～60ng/mlEGF各組的極體率(90．67～88．46％)與未

5、添加組(75．68％)相比較，均有顯著提高(P<0．05)，尤以添加20ng/ml的極體率最高(92.86％)，但添加EGF的各組之間極體率無(wú)顯著差異。成熟液中添加EGF明顯提高了卵母細(xì)胞受精后的發(fā)育能力。發(fā)情綿羊血清可以替代發(fā)情山羊血清作為山羊精子的獲能物質(zhì)，卵裂率達(dá)60．42％；受精液中添加5％、10％、20％發(fā)情羊血清的三組卵裂率分別為58．33％、59．72％和62.50％，顯著高于而不含發(fā)情羊血清組(0％，P<0．01)。受精

6、液中添加10 μg/ml和20 μg/ml肝素組的卵裂率分別為87．69％和85．71％(P>0．05)，兩組間無(wú)顯著差異，但這兩組的卵裂率均極顯著地高于不含肝素組(59．02％，P<0．01)。發(fā)育液中添加1％EAA組的囊胚率顯著地高于添加2％EAA組(29．17％VSl7．10％，P<0．05)。5％CO<,2>的空氣與混合氣(5％CO<,2>+5％O<,2>+90％N<,2>)的桑椹胚率無(wú)顯著差異(P>0．05)，但混合氣的囊胚率

7、為30．16％，顯著高于5％CO<,2>的空氣的16．27％(P<0．05)，說(shuō)明低氧條件(混合氣)對(duì)囊胚的形成有促進(jìn)作用。發(fā)育液中添加5～40ng/ml的EGF各組與對(duì)照組(不含EGF組)相比較，囊胚率均有顯著提高(P<0．05)，但添加80ng/mlEGF組的囊胚率急劇下降到了5.50％，顯著低于對(duì)照組(1.5.29％，P<0.05)，極顯著地低于添加5～40ng/mlEGF的各組(28.75％、32.76％、31.25％、26.7