影響犢牛和成年牛體外受精效果主要因素研究.pdf

1、本研究系統(tǒng)地探討了影響成年牛和犢牛體外受精效果以及誘導(dǎo)犢牛卵泡發(fā)育效果的諸多因素，建立了一套比較完善的體外受精的操作體系，并且，初步搭建了誘導(dǎo)犢牛卵泡發(fā)育以及犢牛卵母細(xì)胞體外受精平臺(tái)，為今后繼續(xù)深入研究提供了良好的技術(shù)支持。
　　 以屠宰場卵巢為試驗(yàn)材料，通過抽吸法采集卵母細(xì)胞，分別研究了卵泡液（Bovine Follicular Fluid，BFF）對卵母細(xì)胞成熟效果的影響、洗滌精子時(shí)離心速率對精子處理效果的影響、不同培養(yǎng)方法

2、、不同培養(yǎng)環(huán)境以及果糖代替葡萄糖對胚胎發(fā)育的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明：添加10％血清組與添加10％血清+10％BFF組的極體率、卵裂率以及囊胚率差異均不顯著（80.0％ vs 76.7％；55.8％ vs 56.3％；20.69％ vs 21.4％）（P>0.05），但是，這兩組的各項(xiàng)指標(biāo)均顯著好于對照組（50.0％；32.0％；12.5％）（P<0.05），數(shù)據(jù)顯示添加10％ BFF組受精卵后期發(fā)育要好于未添加組。在對精子進(jìn)行離心時(shí),750

3、rpm和1000rpm對精子損傷度較小，并且受精卵卵裂率均顯著高于1500rpm組（43.5％，52.1％,26.5％，P<0.05）。750rpm和1000rpm組統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異不顯著，但是后者卵裂率要高于前者（43.5％ vs 52.1％）。兩步法培養(yǎng)組和三步法培養(yǎng)組囊胚率差異雖然不顯著（28.2％ vs 28.9％，P>0.05），但是后者卵裂率要顯著高于前者（59.2％ vs 50.0％，P<0.05）。以5％CO2+空氣為對照組

4、，研究卵丘細(xì)胞共培養(yǎng)和90％N2，5％CO2，5％O2對胚胎發(fā)育的影響，結(jié)果表明三個(gè)試驗(yàn)組中卵裂率差異均不顯著（44.3％，50.8％ and 48.4％，P>0.05），共培養(yǎng)和混合氣組的囊胚率差異不顯著（32.3％ vs 30.0％，P>0.05），但是均顯著高于5％CO2+空氣組（P<0.05）。對第8d囊胚進(jìn)行雙重染色時(shí)，以Triton X-100處理60～70s時(shí)效果最好，內(nèi)細(xì)胞團(tuán)（ICM）細(xì)胞數(shù)與細(xì)胞總數(shù)比例約為0.33。以

5、1.5mM果糖代替葡萄糖后，兩者卵裂率（62.2％ vs 60.7，P>0.05）與囊胚率（32.0％ vs 29.7％，P>0.05）差異均不顯著，但是，數(shù)據(jù)顯示前者ICM細(xì)胞數(shù)和滋養(yǎng)層（TE）細(xì)胞數(shù)均高于后者（43.6 vs 40.2，99.3 vs 89.9）。
　　 在誘導(dǎo)荷斯坦?fàn)倥Ｂ雅莅l(fā)育及體外受精研究試驗(yàn)中，分別從日齡、培養(yǎng)條件和供體個(gè)體差異三個(gè)方面對4～9周齡犢牛JIVET（Juvenile In Vitro Em

6、bryo Transfer）技術(shù)的影響進(jìn)行了初步研究。試驗(yàn)結(jié)果如下：不同日齡的10頭母犢激素誘導(dǎo)卵泡發(fā)育后,30～40d母犢平均獲卵數(shù)為31.8±9.75枚,46～63d的母犢平均獲卵數(shù)為21.8±11.67枚，二者差異不顯著（P>0.05）；在體外成熟培養(yǎng)24h后，犢牛第一極體排出率與成年牛差異不顯著（76.7％ vs 82％，P>0.05）；犢牛胚胎在低氧(5％ CO2，5％ O2，90％ N2)條件下和與顆粒細(xì)胞共培養(yǎng)條件（5％C