波爾山羊精子體外獲能及體外受精的研究.pdf

1、該試驗(yàn)就國內(nèi)近些年來引進(jìn)的波爾山羊進(jìn)行了精子體外獲能和體外受精的研究,利用去透明帶倉鼠卵穿透試驗(yàn)和臺(tái)盼藍(lán)-姬姆薩雙重頂體染色(TG)技術(shù)檢測了精子的死活和獲能效果,同時(shí)將獲能的精子與體外培養(yǎng)成熟的屠宰山羊卵母細(xì)胞和超排山羊卵母細(xì)胞進(jìn)行了體外受精試驗(yàn).在獲能液中孵育2~3h后,部分精子呈超激活運(yùn)動(dòng)方式,表現(xiàn)為激烈的穿梭運(yùn)動(dòng)和"鞭打樣"運(yùn)動(dòng).由此可以初步確認(rèn)精子開始或已經(jīng)獲能.精子用離心法和上游法處理后的頂體反應(yīng)率和活力表明,上游法更有利于

2、波爾山羊精子的處理.洗滌后的精子放入含有20μg/ml肝素的T液(含6mg/mlBSA+10mmol/L HEPES)、B液(含2mg/ml BSA+5mmol/L HEPES)、D液(無BSA和HEPES)三種培養(yǎng)液中進(jìn)行獲能處理,結(jié)果表明T液處理波爾山羊精子的效果明顯優(yōu)于B液和D液,精子孵育4~6h的頂體反應(yīng)率T組極顯著高于D、B組(P<0.01).從培養(yǎng)液對精子的保護(hù)效果來看,培養(yǎng)6h后,T組活力下降緩慢,優(yōu)于D、B組.無論那種培

3、養(yǎng)液,精子獲能4h和6h的效果優(yōu)于4h以前的獲能效果,差異極顯著(P<0.01),而這兩個(gè)時(shí)間段之間差異不顯著(P>0.05).無論是從頂體反應(yīng)率還是從穿透率上看,肝素的添加劑量以20μg/ml和50μg/ml的效果較好,與20μg/ml以下肝素組的效果相比差異極顯著(P<0.01),這兩個(gè)水平之間效果差異不顯著(P>0.05).鈣離子載體的添加劑量以0.3μmol/L為宜,頂體反應(yīng)率和去透明帶倉鼠穿透率均高于其它劑量組.咖啡因與肝素、

4、鈣離子載體具有協(xié)同作用,尤其與鈣離子載體的協(xié)同作用更加明顯,去透明帶倉鼠卵穿透率達(dá)到78.3﹪.無論是肝素還是鈣離子載體,獲能精子與去透明帶倉鼠卵孵育4h和6h的穿透率均高于2h時(shí)的穿透率.經(jīng)肝素誘導(dǎo)的獲能精子與山羊成熟卵母細(xì)胞進(jìn)行體外受精的適宜時(shí)間為17h,時(shí)間短時(shí)精卵未完全結(jié)合,時(shí)間長則對受精卵的進(jìn)一步發(fā)育不利.超排山羊卵母細(xì)胞的受精率略高于體外培養(yǎng)成熟的屠宰山羊卵母細(xì)胞.山羊的凍精比較脆弱,獲能后活力急劇下降.從頂體反應(yīng)率來看,鮮