2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、東南大學(xué)博士學(xué)位論文Notch信號通路及轉(zhuǎn)錄因子SV40在肝癌發(fā)生中的作用機(jī)制研究姓名:范任華申請學(xué)位級別:博士專業(yè):基礎(chǔ)醫(yī)學(xué);免疫學(xué)指導(dǎo)教師:陳平圣20110920中文摘要共同作用上調(diào)核轉(zhuǎn)錄因子LSF的表達(dá),促使細(xì)胞進(jìn)入Gl/S周期,二者協(xié)同促使肝細(xì)胞轉(zhuǎn)化增殖,很有可能在很多情況下起動肝細(xì)胞的癌變。我們設(shè)計一系列的實驗來研究Notch信號與RaS以及LSF在肝細(xì)胞癌變中的作用,為弄清肝細(xì)胞癌發(fā)生機(jī)制以及尋找新的治療肝癌方法提供實驗依據(jù)

2、。研究目的:研究Notch信號通路,Ras蛋白及核轉(zhuǎn)錄因子SV40在肝癌發(fā)生中的作用機(jī)制研究方法:1組織標(biāo)本收集與免疫組織化學(xué):肝癌病人組織標(biāo)本由南京市第一醫(yī)院病理科提供2008120106期間25例肝癌病人組織蠟塊,其中男性20例,女性5例。標(biāo)本通過HE染色和免疫組化標(biāo)記診斷肝癌,并依據(jù)病理及細(xì)胞學(xué)證據(jù)區(qū)分類型。2細(xì)胞系與藥物:人肝癌細(xì)胞系:HepG2,Bel一7402,QGY7703購于中科院上海細(xì)胞庫。人胚腎上皮細(xì)胞(HEK),人

3、肝星狀細(xì)胞(HSC)由本實驗室保存,肝細(xì)胞系L02細(xì)胞由中國藥科大學(xué)徐民饋贈。Y分泌酶抑制劑DAPT由東南大學(xué)卜曉東老師饋贈,用各種濃度的DAPT處理HepG2與L02細(xì)胞,以阻斷Notch信號的激活。3構(gòu)建HRaS_pEGFPCl,NICDlpEGFP—Cl,LSFpEGFP—Cl重組載體,然后轉(zhuǎn)染,設(shè)立陰性和陽性對照,G418篩選獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。4蛋白免疫印跡:利用NotchlICD(CellSi印alingTeclulolog

4、y,MA,USA),LSF(AbcamInco叩oration,MA,USA),H—R2us(OncogeneResearchProducts,CA,USA)andpactin(SalltaCruzBiotechnology,CA,USA)等一抗鑒定各重組載體表達(dá)蛋白及轉(zhuǎn)染效率。5熒光素酶報告基因?qū)嶒灒簶?gòu)建LSFpGL3重組載體,然后轉(zhuǎn)染,設(shè)立陰性和陽性對照,檢測熒光數(shù)值。6細(xì)胞增殖與活力檢測實驗:用MTT實驗檢測轉(zhuǎn)染的HepG2與轉(zhuǎn)化

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