復方血栓通抗糖尿病視網(wǎng)膜病變神經(jīng)細胞凋亡的動物研究.pdf

1、中山大學碩士學位論文復方血栓通抗糖尿病視網(wǎng)膜病變神經(jīng)細胞凋亡的動物研究E x p e r i m e n t a l s t u d yo ft h eE f f e c to fF u f a n gX u e S h u a n T o n ga g a i n s t t h e a p o p t o s i So fR e t i n a l N e u r o n c y t e i n D R專 業(yè) 眼科學申請人 陳瀟導

2、師 于強教授答辯摭佃輜蛾緲．厴鶴 場移髯= j ≮蹲本課題由廣東省東莞市科技局提供基金資助中山大學中山眼科中心廣州·中國2 0 0 7 年5 月2 3 日，。÷。；復方血栓通抗精尿病視網(wǎng)膜病變神經(jīng)細胞弼亡的動物研究治療組：糖尿病大鼠，接受復方血栓通( 9 0 0 m g ／k g ／d a y ) 治療；實驗進行到第1 2 周的時候，做如下處理：( 1 ) 視網(wǎng)膜消化鋪片研究：每組取6 只動物，麻醉后取其一只眼球進行

3、石蠟包埋、切片，H E 染色進行病理形態(tài)觀察，節(jié)細胞計數(shù)以及內(nèi)核層厚度測量；( 2 ) 采用熒光免疫組織化學的方法檢測視網(wǎng)膜組織中C a s p a s e - 3 的表達量；( 3 ) 提取視網(wǎng)膜組織的蛋白，采用分光光度法檢測各組動物視網(wǎng)膜組織中C a s p a s e ．3 的活力；用W e s t e r n ．B l o t 的方法檢測組織中B c l ．2 以及B a x 蛋白的表達量；( 4 ) 提取視網(wǎng)膜組織當中的R N

4、 A ，反轉(zhuǎn)錄，P C R ，電泳以檢測組織中B c l ．2以及B a x 在R N A 水平的表達。結(jié)果：( 1 ) 各組大鼠的一般情況正常組：正常組大鼠精神正常，毛色光亮，運動靈活。對照組：對照組大鼠可觀察到精神倦怠、萎靡，毛色枯槁，“三多一少”癥狀明顯。治療組：同對照組一樣表現(xiàn)出精神萎靡，毛色枯槁，“三多一少”癥狀也很明顯。( 2 ) 視網(wǎng)膜形態(tài)學改變H E 染色：正常組大鼠視網(wǎng)膜各層結(jié)構(gòu)清楚，層次分明，排列整齊，各級神經(jīng)細胞大

5、小均勻；節(jié)細胞層排列整齊，胞核清楚，染色深，內(nèi)核層約5 - 6 層細胞，胞核清楚，染色深，排列緊湊。對照組大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞排列紊亂，數(shù)目減少，細胞空泡樣變，核固縮，部分核溶解。內(nèi)外叢狀層變薄，內(nèi)核層變薄，細胞數(shù)目減少，排列紊亂，染色不均勻。治療組大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞排列紊亂，數(shù)目有所減少，較對照組增多。少量細胞出現(xiàn)空泡樣變，內(nèi)核層輕度變薄，內(nèi)外叢狀層厚度未見明顯改變。視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞計數(shù)發(fā)現(xiàn)正常組大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞為( 2 1 ．

6、6 5 ±2 ．1 3 ／H P ) ，對照組大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)目明顯變少( 1 5 ．5 6 ±1 ．1 3 ／H P ) ，治療組相對對照組有所增多( 1 8 ．8 7 ±1 ．2 9 ) 。視網(wǎng)膜內(nèi)核層厚度測量發(fā)現(xiàn)正常組的大鼠內(nèi)核層為( 1 5 ．5 6 ±1 ．4 7 p m ) ，對照組相對正常組變薄( 1 0 ．7 0 ±1 ．3 1 I l m ) ，而治療組的大鼠視網(wǎng)